2) прямой метод swim-up (+)
3) ферментативный метод анализа
4) простое отмывание
Прямой метод swim-up основан на активной миграции подвижных сперматозоидов из разжиженного эякулята в расположенную над ним культуральную среду. После инкубации при температуре, близкой к физиологической (обычно 37 °C), сперматозоиды с сохранённой прогрессивной подвижностью самостоятельно перемещаются в верхний слой среды; именно этот слой затем осторожно отбирают для использования в процедурах ВРТ или последующего анализа.
Метод позволяет получить фракцию, обогащённую морфологически более полноценными и прогрессивно подвижными сперматозоидами, одновременно уменьшая содержание семенной плазмы, неподвижных клеток, клеточного детрита и части лейкоцитов. Эффективность swim-up зависит от исходной концентрации и подвижности сперматозоидов, поэтому при выраженной олигозооспермии или астенозооспермии выход клеток может быть низким. В отличие от него, центрифугирование в градиенте плотности разделяет клетки преимущественно по плотности и способности проходить через градиент, а простое отмывание удаляет семенную плазму центрифугированием без отбора сперматозоидов по их активной миграции.
Прямой вариант swim-up выполняют непосредственно из разжиженного эякулята без предварительного осаждения клеток. Он особенно целесообразен при удовлетворительной концентрации и подвижности сперматозоидов, когда требуется щадящая селекция прогрессивно подвижной фракции с минимальным механическим воздействием.
| Метод | Основной принцип | Получаемая фракция | Преимущества | Ограничения |
|---|---|---|---|---|
| Прямой swim-up | Активное выплывание подвижных сперматозоидов из эякулята в слой культуральной среды | Преимущественно прогрессивно подвижные сперматозоиды | Щадящая селекция, снижение количества семенной плазмы и клеточного детрита | Низкий выход при тяжёлой олигозооспермии и выраженной астенозооспермии |
| Непрямой swim-up | Вначале формируют осадок сперматозоидов, затем над ним наслаивают культуральную среду | Подвижные клетки, мигрировавшие из осадка в среду | Возможность предварительно сконцентрировать сперматозоиды | Дополнительное центрифугирование повышает риск механического повреждения и образования активных форм кислорода |
| Градиент плотности | Центрифугирование через слои среды различной плотности | Более плотная фракция с подвижными и относительно зрелыми сперматозоидами | Эффективное удаление семенной плазмы, клеточного детрита и части лейкоцитов | Метод основан на центрифугировании и различии плотности, а не на самостоятельном выплывании клеток |
| Простое отмывание | Разбавление культуральной средой с последующим центрифугированием | Осадок сперматозоидов без специфической селекции по подвижности | Техническая простота, удаление части семенной плазмы | Сохраняются неподвижные и морфологически аномальные клетки; возможна травма при центрифугировании |
| Ферментативный метод анализа | Оценка активности ферментов или определённых молекулярных маркеров | Диагностическая информация о функциональном состоянии клеток или эякулята | Позволяет исследовать отдельные биохимические параметры | Не является методом выделения сперматозоидов из семенной плазмы |
Ключевым диагностико-технологическим признаком swim-up является зависимость результата от собственной прогрессивной подвижности сперматозоидов. Отобранная фракция обычно характеризуется лучшей функциональной пригодностью по сравнению с исходным эякулятом. Перед применением метода обязательны разжижение эякулята и соблюдение асептики, температурного режима и времени инкубации. Выбор между swim-up и градиентом плотности определяют по спермограмме, прежде всего по концентрации, прогрессивной подвижности и количеству клеточного детрита.