2) биохимическое исследование крови
3) подготовительный этап (+)
4) исследование антигенов системы HLA супругов
Перед проведением ПГТ-М при муковисцидозе необходим подготовительный этап, поскольку требуется индивидуально разработать и валидировать молекулярно-генетическую тест-систему для конкретной семьи. Муковисцидоз — аутосомно-рецессивное заболевание, обусловленное патогенными вариантами гена CFTR, расположенного на хромосоме 7. На этом этапе уточняют семейные мутации, проводят генотипирование обоих партнеров и, при необходимости, других родственников, а также устанавливают фазу сцепления вариантов с полиморфными маркерами.
Для последующего анализа эмбрионов применяют прямое выявление патогенного варианта и исследование близлежащих информативных маркеров. Это повышает надежность диагностики и снижает риск аллельного выпадения — ситуации, при которой во время амплификации анализируется только одна из двух аллелей. Подготовительный этап также включает проверку информативности маркеров, оптимизацию ПЦР или секвенирования и контроль качества на образцах семьи; только после этого материал эмбрионов, полученных в цикле ЭКО, может быть корректно интерпретирован.
Исследование AZF локуса предназначено главным образом для оценки генетических причин мужского бесплодия и не определяет риск передачи мутаций CFTR. Типирование HLA используется при подборе совместимого донора или в отдельных программах репродуктивной генетики, но не является стандартным этапом ПГТ-М муковисцидоза. Биохимическое исследование крови может входить в общее обследование пары, однако не заменяет молекулярную верификацию вариантов CFTR и разработку семейного диагностического протокола.
| Исследование или этап | Основная цель | Значение для ПГТ-М при муковисцидозе |
|---|---|---|
| Молекулярное исследование гена CFTR | Выявление и подтверждение патогенных вариантов у пациента и партнеров | Определяет генетическую мишень, которую необходимо искать в клетках эмбриона |
| Генотипирование родственников | Уточнение происхождения мутаций и информативности семейных образцов | Повышает точность установления наследования патологического аллеля |
| Определение фазы сцепления | Установление, с какой аллелью связана патогенная мутация | Позволяет интерпретировать результаты косвенного анализа по маркерам |
| Анализ полиморфных маркеров около CFTR | Отслеживание наследования хромосомного участка, связанного с мутацией | Дополняет прямое выявление варианта и помогает контролировать аллельное выпадение |
| Валидация тест-системы | Проверка чувствительности, специфичности и воспроизводимости метода на семейных образцах | Обязательна до исследования эмбрионов; формирует индивидуальный протокол ПГТ-М |
| Исследование AZF локуса хромосомы Y | Диагностика микроделеций Y-хромосомы при нарушении сперматогенеза | Не связано с наследованием мутаций CFTR и не заменяет подготовку к ПГТ-М |
| Типирование HLA | Определение антигенной совместимости по системе HLA | Не требуется для стандартного отбора эмбрионов по риску муковисцидоза |
После завершения подготовки проводят стимуляцию овуляции, ЭКО с формированием эмбрионов и биопсию трофэктодермы. Результаты ПГТ-М оценивают совместно с контролем плоидности и данными клинической генетики, если это предусмотрено протоколом. Переносу подлежат эмбрионы без исследуемого патогенного генотипа, с учетом репродуктивного законодательства и обязательного медико-генетического консультирования. Даже при технически корректном результате ПГТ-М обычно рекомендуется подтверждающая пренатальная диагностика беременности.