2) через сутки
3) через 10-20 минут
4) незамедлительно (+)
При интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) отобранный сперматозоид обычно иммобилизируют механически: хвост прижимают к поверхности чашки или стенке капилляра. Это прекращает его движение и частично повреждает плазматическую мембрану, что облегчает последующее слияние сперматозоида с оолеммой и проникновение в ооплазму. После этого сперматозоид аспирируют в инъекционную пипетку и вводят в ооцит без промежуточной выдержки.
Немедленное введение необходимо для сохранения жизнеспособности и функциональной полноценности сперматозоида. Ожидание после иммобилизации увеличивает время его контакта с несвойственной средой, включая поливинилпирролидон, способствует дегенеративным изменениям и может снижать вероятность нормального оплодотворения. После попадания сперматозоида в ооцит фактор активации, главным образом фосфолипаза C-зета (PLCζ), запускает кальциевые колебания и последовательность реакций ооцитарной активации.
Таким образом, иммобилизация является непосредственно предшествующим этапом ИКСИ, а не процедурой, после которой сперматозоид хранят или выдерживают. Задержка на десятки минут, часы или сутки не имеет физиологического преимущества и может ухудшить эмбриологический результат. Правильный принцип — минимальный интервал между механическим обездвиживанием, аспирацией и инъекцией.
| Этап | Основное действие | Биологическое значение | Возможный риск при нарушении последовательности |
|---|---|---|---|
| Отбор сперматозоида | Выбор клетки с сохранённой морфологией и признаками жизнеспособности | Снижение вероятности введения дегенерировавшего или генетически повреждённого сперматозоида | Ухудшение показателей оплодотворения и раннего развития эмбриона |
| Механическая иммобилизация | Прижатие или повреждение хвоста инъекционной пипеткой | Прекращение движения и облегчение контакта сперматозоида с оолеммой | При недостаточной иммобилизации возможны трудности с захватом и введением клетки |
| Аспирация в пипетку | Захват сперматозоида обычно с ориентированием хвоста | Контроль положения клетки и безопасное проведение через оолемму | Дополнительная травматизация сперматозоида или ооцита |
| Введение в ооцит | Доставка сперматозоида в ооплазму с минимальным объёмом среды | Создание условий для деконденсации головки и запуска активации ооцита | Снижение вероятности нормального оплодотворения при задержке после иммобилизации |
| Активация ооцита | Формирование кальциевых колебаний после проникновения сперматозоида | Возобновление мейоза, формирование женского и мужского пронуклеусов | Аномальная активация или отсутствие оплодотворения |
| Исходно неподвижный сперматозоид | Проверка жизнеспособности с помощью HOS-теста или лазерной стимуляции хвоста | Позволяет отличить живую неподвижную клетку от нежизнеспособной | Инъекция нежизнеспособного сперматозоида снижает эффективность ИКСИ |
При выраженной астенозооспермии или полной неподвижности сперматозоидов особенно важно подтверждать их жизнеспособность до инъекции. Для этого могут использоваться гипоосмотический тест, оценка локального движения хвоста или лазерная стимуляция. После выбора жизнеспособной клетки сохраняется тот же принцип: иммобилизация должна непосредственно предшествовать введению в ооцит.