2) средой для манипуляций (+)
3) гепарина раствором
4) физиологическим раствором
Среда для манипуляций предназначена для кратковременного нахождения и обработки гамет вне контролируемой атмосферы инкубатора. Обычно она содержит HEPES- или MOPS-буфер, поддерживающий физиологический pH при работе на подогреваемой поверхности в условиях атмосферного воздуха, а также сбалансированный состав электролитов, энергетические субстраты и белковую добавку. Это позволяет безопасно обнаруживать ооцит-кумулюсные комплексы в фолликулярной жидкости, промывать их и переносить в последующую культуральную систему без выраженных колебаний температуры, осмоляльности и кислотно-основного состояния.
Среда для оплодотворения используется на следующем этапе — при совместной инкубации ооцитов со сперматозоидами — и обычно требует предварительного уравновешивания в атмосфере CO2. Физиологический раствор не содержит необходимых питательных компонентов и специализированной буферной системы, поэтому не обеспечивает полноценной защиты ооцита. Раствор гепарина является антикоагулянтом и может применяться как добавка к отдельным системам аспирации, но не служит самостоятельной средой для хранения и обработки полученных комплексов.
| Раствор или среда | Основное назначение | Буферные свойства вне инкубатора | Пригодность для первичной работы с ОКК |
|---|---|---|---|
| Среда для манипуляций | Поиск, промывание, оценка и перенос гамет | Стабильный pH благодаря HEPES или MOPS | Оптимальна |
| Среда для оплодотворения | Инсеминация ооцитов и взаимодействие гамет | Часто зависит от равновесия бикарбонат–CO2 | Используется после первичной обработки |
| Среда для культивирования | Развитие зигот и эмбрионов в инкубаторе | Требует стабильной газовой среды | Не предназначена для длительных манипуляций на воздухе |
| Физиологический раствор | Общемедицинские промывания и инфузионные задачи | Не обеспечивает специализированного контроля pH | Непригоден как среда для гамет |
| Раствор гепарина | Предотвращение образования сгустков | Не является полноценной буферной системой | Не применяется самостоятельно |
| Фолликулярная жидкость | Естественная среда аспирированного комплекса | Быстро изменяет свойства вне организма | ОКК необходимо своевременно перенести в подготовленную среду |
Эффективность этапа получения ооцитов зависит не только от состава среды, но и от поддержания температуры около 37 °C, минимизации времени вне инкубатора и использования материалов, безопасных для эмбриологических процедур. Резкие изменения pH и осмоляльности могут нарушать структуру веретена деления, цитоплазматическое созревание и жизнеспособность клеток кумулюса. После идентификации и промывания ОКК переносят в предварительно подготовленную среду, соответствующую выбранному способу оплодотворения. Такая последовательность снижает стресс гамет и обеспечивает воспроизводимость лабораторного этапа программы ВРТ.