2) гидроксаматов железа или меди (+)
3) оксониевых солей
4) азокрасителя
Амидная группа содержит карбонильный фрагмент, способный в условиях аналитической методики взаимодействовать с гидроксиламином. При нагревании в щелочной среде происходит нуклеофильное замещение у ацильного атома углерода с образованием гидроксамовой кислоты или её соли: R–CONH2 → R–CONHOH. Для амидов и родственных амидных производных эта реакция служит качественной групповой пробой.
Образовавшийся гидроксамат взаимодействует с ионами Fe3+ или Cu2+, формируя окрашенный хелатный комплекс. С железом(III) обычно появляется красно-фиолетовое или пурпурное окрашивание, с медью(II) — сине-зелёное либо зелёное; конкретный оттенок зависит от строения вещества, растворителя и условий проведения реакции. Возникновение характерной окраски после добавления соответствующего иона металла рассматривают как положительный аналитический признак.
Реакция не является абсолютно специфичной для каждого отдельного амидного лекарственного вещества: гидроксаматы могут образовывать и другие реакционноспособные производные карбоновых кислот, например сложные эфиры и некоторые лактамы. Поэтому для окончательного подтверждения подлинности результат сопоставляют с другими фармакопейными испытаниями. Серебряное зеркало преимущественно выявляет альдегиды и другие восстановители, образование азокрасителя характерно для диазотирования первичных ароматических аминов, а образование оксониевых солей не даёт специфического цветного признака амидной группы.
| Исследуемая функциональная группа | Реактив или условие | Химическая основа реакции | Наблюдаемый признак | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Амидная группа | Гидроксиламин в щелочной среде, затем Fe3+ или Cu2+ | Образование гидроксамовой кислоты и её хелатного комплекса с металлом | Красно-фиолетовая, пурпурная, сине-зелёная или зелёная окраска | Положительная групповая реакция на реакционноспособный амидный карбонил |
| Сложные эфиры | Гидроксиламин, щёлочь, затем соль железа(III) | Гидроксамолиз эфирной связи с образованием гидроксамата | Окрашенный комплекс железа(III) | Возможная причина неспецифического положительного результата; требуется дополнительная идентификация |
| Альдегидная группа | Аммиачный раствор оксида серебра(I) | Восстановление Ag+ до металлического серебра | Серебряный налёт на стенках пробирки | Не является характерным критерием наличия амидной группы |
| Первичная ароматическая аминогруппа | Нитрит натрия в кислой среде, затем реакция азосочетания | Диазотирование с последующим образованием азосоединения | Интенсивное жёлтое, оранжевое, красное или малиновое окрашивание | Подтверждает наличие первичного ароматического амина, а не амидного фрагмента |
| Фенольная группа | Диазониевая соль в щелочной среде | Электрофильное азосочетание в ароматическом ядре | Образование окрашенного азокрасителя | Используется для идентификации фенолов и некоторых ароматических аминов |
| Эфирный атом кислорода | Сильная кислота или алкилирующий агент | Протонирование либо алкилирование с образованием оксониевого катиона | Получение оксониевой соли без универсального характерного окрашивания | Не служит основной специфической реакцией на амидную группу |
Гидроксаматная проба основана на сочетании химического превращения и последующего комплексообразования с ионом металла. Наиболее информативным считают не сам факт взаимодействия с гидроксиламином, а появление характерной окраски металлического гидроксамата. При фармакопейной идентификации реакцию оценивают вместе с хроматографическими, спектроскопическими и физико-химическими характеристиками вещества. Такой комплексный подход позволяет отличить амидное лекарственное средство от соединений, также способных давать положительную гидроксаматную реакцию.