2) флуориметрия
3) поляриметрия
4) рефрактометрии
Спектрофотометрия относится к абсорбционным оптическим методам анализа: ее принцип заключается в измерении ослабления электромагнитного излучения при прохождении через исследуемый раствор. Определяют интенсивность падающего излучения и интенсивность света после взаимодействия с веществом, а результат выражают как оптическую плотность или коэффициент пропускания. В фармацевтическом анализе чаще используют ультрафиолетовую и видимую области спектра, где лекарственные вещества поглощают излучение за счет переходов электронов между энергетическими уровнями.
Количественная оценка основана на законе Бугера—Ламберта—Бера: A = ε·l·c, где A — оптическая плотность, ε — молярный коэффициент поглощения, l — длина оптического пути, а c — концентрация вещества. Поэтому при соблюдении условий метода оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации анализируемого компонента. Спектрофотометрия применяется для идентификации веществ по максимуму поглощения и для их количественного определения, в том числе в лекарственных формах и биологических жидкостях.
Другие перечисленные методы регистрируют не поглощение как основной аналитический сигнал. Флуориметрия измеряет интенсивность излучения, испускаемого возбужденными молекулами; поляриметрия — угол вращения плоскости поляризации; рефрактометрия — показатель преломления среды. Именно регистрация изменения интенсивности проходящего электромагнитного излучения вследствие его поглощения является определяющим признаком спектрофотометрии.
| Метод | Измеряемый сигнал | Физическая основа | Типичное применение в фармацевтическом анализе |
|---|---|---|---|
| Спектрофотометрия | Оптическая плотность или пропускание | Поглощение излучения веществом на определенной длине волны | Идентификация и количественное определение лекарственных веществ по закону Бугера—Ламберта—Бера |
| Флуориметрия | Интенсивность флуоресцентного излучения | Испускание света возбужденными молекулами после поглощения энергии | Определение флуоресцирующих веществ или соединений после образования флуоресцентного производного |
| Поляриметрия | Угол вращения плоскости поляризации | Взаимодействие плоскополяризованного света с оптически активными веществами | Контроль удельного вращения и оценка подлинности или концентрации оптически активных соединений |
| Рефрактометрия | Показатель преломления | Изменение скорости и направления распространения света в среде | Контроль чистоты, концентрации растворов и отдельных физических свойств лекарственных субстанций |
| Абсорбционный аналитический сигнал | Разность интенсивности до и после прохождения через образец | Переход энергии электромагнитного излучения к молекулам вещества | Характерный критерий отнесения метода к спектрофотометрическим |
| Спектральный максимум | Наибольшая оптическая плотность при определенной длине волны | Максимальная вероятность соответствующего электронного или колебательного перехода | Используется для выбора аналитической длины волны и подтверждения идентичности вещества |
Таким образом, ключевым признаком спектрофотометрии является непосредственная регистрация поглощения электромагнитного излучения образцом. Для надежного количественного анализа необходимо учитывать длину волны, толщину кюветы, концентрационный диапазон и влияние матрицы. Отклонение от линейности закона Бугера—Ламберта—Бера может быть связано с высокой концентрацией, химическими равновесиями, рассеянием света или посторонним поглощением. В фармацевтической практике метод требует предварительной валидации по специфичности, линейности, точности и прецизионности.