2) Борнтрегера
3) Лафона
4) Либермана – Бурхардта (+)
Реакция Либермана—Бурхардта является характерной качественной реакцией на стероидные соединения, прежде всего стеролы и близкие к ним стероидные структуры. Исследуемое вещество растворяют в хлороформе, добавляют уксусный ангидрид, а затем осторожно концентрированную серную кислоту. Появление зелёного или сине-зелёного окрашивания, иногда с промежуточными розово-фиолетовыми оттенками, указывает на наличие соединений со стероидным ядром.
В основе реакции лежат кислотно-катализируемая дегидратация, окислительно-восстановительные превращения и перегруппировки стероидной молекулы с образованием сопряжённых окрашенных ионных форм. Интенсивность и оттенок окраски зависят от строения вещества, положения гидроксильных и карбонильных групп, а также от условий проведения анализа. Реакция не является абсолютным доказательством конкретной структуры, поэтому в фармацевтическом анализе её оценивают совместно с нормативными данными, реакцией со стандартным образцом и, при необходимости, результатами тонкослойной хроматографии, ИК-спектроскопии или ВЭЖХ.
| Реакция | Основные реактивы | Положительный результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Либермана—Бурхардта | Уксусный ангидрид и концентрированная серная кислота, обычно в присутствии хлороформа | Зелёное или сине-зелёное окрашивание, возможны промежуточные фиолетовые оттенки | Идентификация стеролов, стероидов и ряда тритерпеновых соединений |
| Сальковского | Раствор вещества в хлороформе и концентрированная серная кислота | Красное, бурое или желтоватое окрашивание на границе слоёв; иногда флуоресценция хлороформного слоя | Дополнительная качественная проба на стеролы и некоторые стероидные структуры |
| Борнтрегера | Экстракция органическим растворителем с последующим добавлением щёлочи | Розовое или красное окрашивание щелочного слоя | Выявление антрахинонов и антрагликозидов, а не стероидных соединений |
| Марки | Концентрированная серная кислота и формальдегид | Различные интенсивные окраски, зависящие от природы вещества | Ориентировочное обнаружение ряда алкалоидов и других легко конденсирующихся соединений |
| Кедде | 3,5-Динитробензойная кислота и щёлочь | Фиолетовое или пурпурное окрашивание | Выявление α,β-ненасыщенного пятичленного лактонного цикла сердечных гликозидов |
| Келлера—Килиани | Ледяная уксусная кислота, хлорид железа(III) и концентрированная серная кислота | Бурое кольцо на границе слоёв, иногда голубовато-зелёное окрашивание верхнего слоя | Обнаружение дезоксисахаров в сердечных гликозидах; не является общей реакцией на все стероиды |
| Балье | Пикрат натрия или пикриновая кислота в щелочной среде | Оранжево-красное окрашивание | Качественная реакция преимущественно на карденолиды сердечных гликозидов |
Выбор реакции определяется функциональными группами и структурными фрагментами анализируемого вещества. Реакция Либермана—Бурхардта наиболее соответствует задаче общей идентификации стероидного ядра, тогда как реакции Кедде, Келлера—Килиани и Балье направлены на отдельные фрагменты сердечных гликозидов. При оценке результата важно соблюдать последовательность добавления реактивов, контролировать их концентрацию и использовать холостой опыт, поскольку окраска может изменяться при наличии примесей или влаги.