2) нингидриновую пробу (+)
3) реакцию образования оксониевых солей
4) реакцию образования азокрасителя
Для идентификации лекарственных веществ с первичной алифатической аминогруппой, особенно с α-аминокарбоксильным фрагментом, применяют нингидриновую пробу. При нагревании в присутствии нингидрина свободная аминогруппа подвергается окислительному дезаминированию; для α-аминокислот дополнительно происходит декарбоксилирование с выделением аммиака. В результате образуется интенсивное сине-фиолетовое окрашивание, известное как пурпур Руэмана.
Положительная реакция указывает на наличие доступной первичной аминогруппы, поэтому она используется как качественный критерий подлинности соответствующих лекарственных веществ. Реакция может ослабевать или отсутствовать, если аминогруппа связана в амид, замещена по атому азота либо недоступна из-за образования устойчивой соли; поэтому результат оценивают с учетом химической структуры вещества и условий проведения анализа.
Другие перечисленные реакции имеют иную функциональную специфичность. Серебряное зеркало характерно прежде всего для альдегидной группы, образование азокрасителя основано на диазотировании и последующем азосочетании первичных ароматических аминов, а образование оксониевых солей связано с протонированием кислородсодержащих соединений и не является специфичным признаком первичной алифатической аминогруппы.
| Функциональная группа или структурный фрагмент | Идентификационная реакция | Механистическая основа | Аналитический признак |
|---|---|---|---|
| Первичная алифатическая аминогруппа R–NH2 | Нингидриновая проба | Окислительное дезаминирование с последующим образованием окрашенного конденсационного продукта | Сине-фиолетовое или фиолетовое окрашивание |
| α-Аминокарбоксильная группа H2N–CH(R)–COOH | Нингидрин, обычно при нагревании | Дезаминирование и декарбоксилирование; аммиак участвует в формировании пурпура Руэмана | Интенсивное фиолетовое окрашивание; у иминокислот возможны желтые оттенки |
| Первичная ароматическая аминогруппа Ar–NH2 | Диазотирование и азосочетание | Образование соли диазония при низкой температуре с последующим сочетанием с ароматическим компонентом | Появление интенсивного окрашенного азосоединения |
| Альдегидная группа –CHO | Реакция Толленса | Восстановление ионов серебра(I) до металлического серебра | Серебряное зеркало или осадок серебра |
| Кислородсодержащие соединения с неподеленной электронной парой | Образование оксониевых солей | Протонирование атома кислорода сильной кислотой | Образование солеподобного оксониевого соединения; реакция неспецифична для аминогруппы |
| Вторичные, третичные амины и амиды | Нингидриновая проба | Отсутствует свободная первичная аминогруппа, необходимая для типичного превращения | Отрицательная или существенно менее выраженная реакция |
Нингидриновая проба является прежде всего реакцией на свободную первичную аминогруппу, а не на любой атом азота в молекуле. Наиболее надежная интерпретация результата возможна при сопоставлении окрашивания с нормативной документацией и данными о строении препарата. Для подтверждения подлинности в фармацевтическом анализе реакцию при необходимости дополняют инструментальными методами, такими как инфракрасная спектроскопия или высокоэффективная жидкостная хроматография.