2) реактив судан III (+)
3) метиленовую синь
4) реактив Драгендорфа
Для выявления жирного масла применяют Судан III — жирорастворимый азокраситель, обладающий выраженным сродством к липидной фазе. При нанесении реактива на растительный микропрепарат краситель растворяется в каплях нейтрального жира, представленного преимущественно триацилглицеринами, и окрашивает их в оранжево-красный или красный цвет. Такое окрашивание позволяет обнаружить запасающие липиды в клетках семян, плодов и других органов лекарственных растений.
Проба с Суданом III относится к гистохимическим реакциям распределения: специфический цвет возникает не вследствие образования нового химического соединения, а благодаря преимущественному переходу липофильного красителя из водно-спиртовой среды в жировые включения. Реактив Люголя используют главным образом для выявления крахмала, реактив Драгендорфа — алкалоидов, а метиленовая синь не является специфическим реагентом на жирные масла.
Диагностическое значение реакции определяется локализацией окрашенных капель, их формой и распределением в тканях. При микроскопии жирное масло обычно выявляется в виде округлых внутриклеточных включений, которые не растворяются в воде, но исчезают или уменьшаются после обработки органическими растворителями. Совокупность этих признаков помогает отличить липидные включения от крахмальных зерен, слизей и окрашенных продуктов вторичного обмена.
| Реактив или метод | Выявляемое вещество | Положительный признак | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Судан III | Нейтральные жиры, жирные масла | Оранжево-красное окрашивание жировых капель | Основная микрогистохимическая проба на липидные включения |
| Судан IV | Нейтральные липиды | Интенсивное красное окрашивание | Альтернативный липофильный краситель с более насыщенной окраской |
| Тетраоксид осмия | Преимущественно ненасыщенные липиды | Бурое или черное окрашивание | Выявление жиров за счет восстановления соединения осмия |
| Реактив Люголя | Крахмал | Синее, сине-фиолетовое или почти черное окрашивание | Позволяет дифференцировать крахмальные зерна от жировых включений |
| Реактив Драгендорфа | Алкалоиды | Оранжевый или оранжево-бурый осадок | Применяется для качественного обнаружения азотсодержащих оснований |
| Метиленовая синь | Кислые клеточные структуры и отдельные микроорганизмы | Синее окрашивание | Не обладает достаточной специфичностью в отношении жирных масел |
При проведении реакции важно исследовать свежий срез или порошок лекарственного растительного сырья, поскольку фиксация спиртом и обработка некоторыми растворителями могут извлекать липиды из клеток. Положительный результат оценивают только при отчетливом окрашивании отдельных жировых капель, а не всего препарата. Для повышения достоверности микроскопический признак сопоставляют с анатомическим строением сырья и результатами других качественных реакций. Судан III поэтому служит простым и наглядным реагентом для подтверждения наличия жирного масла в растительных тканях.