2) тиохромная
3) эритрохинная
4) гидроксамовая
Нингидриновая проба основана на взаимодействии нингидрина со свободной α-аминогруппой аминокислоты или ее производного. При нагревании происходит окислительное дезаминирование и декарбоксилирование соединения с образованием аммиака; восстановленный нингидрин и аммиак формируют окрашенный продукт — пурпур Руемана. Появление интенсивного сине-фиолетового или фиолетового окрашивания служит фармакопейным признаком подлинности.
Реакция особенно характерна для первичных аминогрупп, поэтому ее применяют при идентификации аминокислот и лекарственных веществ, сохраняющих соответствующий функциональный фрагмент. Для иминокислот, например пролина и гидроксипролина, вместо фиолетовой окраски может наблюдаться желтая, что связано с иной структурой вторичной аминогруппы. Оценку проводят с учетом требований фармакопейной статьи: важны используемый растворитель, концентрация реагента, нагревание и характер развившейся окраски.
| Проба | Основная структурная мишень | Механизм | Диагностический результат |
|---|---|---|---|
| Нингидриновая | Свободная первичная α-аминогруппа аминокислот | Окислительное дезаминирование, декарбоксилирование и образование окрашенного комплекса с аммиаком | Сине-фиолетовое или фиолетовое окрашивание; для иминокислот возможно желтое |
| Тиохромная | Тиамин и вещества с соответствующей тиазолиевой структурой | Окисление тиамина с образованием тиохрома в щелочной среде | Синяя флуоресценция в ультрафиолетовом свете |
| Гидроксамовая | Эфирная, лактонная или родственная карбонильная группа | Образование гидроксамовой кислоты с последующим комплексообразованием с ионами Fe3+ | Красно-фиолетовое или пурпурное окрашивание комплекса железа |
| Эритрохинная | Отдельные хинолиновые алкалоиды, прежде всего хинин | Специфическое окислительно-цветное превращение хинолинового соединения | Характерная окраска, используемая для идентификации хининсодержащих веществ |
| Мурексидная | Производные пурина и мочевой кислоты | Окислительное превращение пуринового ядра с образованием окрашенных продуктов | Красно-фиолетовая окраска мурексида |
| Диазотирования и азосочетания | Первичные ароматические аминогруппы | Образование диазониевой соли и ее сочетание с ароматическим компонентом | Интенсивная желтая, оранжевая или красная окраска азосоединения |
Таким образом, нингидриновая проба является качественной реакцией на аминокислотный фрагмент, а не универсальным тестом для любых азотсодержащих веществ. Ее специфичность определяется наличием доступной аминогруппы и условиями проведения реакции. Отсутствие ожидаемой окраски может быть связано с блокированием аминогруппы, недостаточной растворимостью вещества или нарушением методики. При фармакопейной идентификации результат оценивают совместно с другими физико-химическими показателями и реакциями на подлинность.