2) желатином
3) железа (III) аммония сульфата раствором
4) алюминия хлорида раствором (+)
Для проявления флавоноидов на хроматограмме применяют раствор алюминия хлорида. Ионы Al3+ координируются с кислородсодержащими функциональными группами флавоноидного ядра, прежде всего с сочетанием карбонильной группы и гидроксильных групп в положениях 3 или 5. Образующиеся хелатные комплексы изменяют электронную систему молекулы, поэтому пятна становятся окрашенными или приобретают интенсивную жёлтую, жёлто-зелёную либо оранжевую флуоресценцию при УФ-освещении, особенно при 365–366 нм.
Реакция с алюминия хлоридом используется как специфичный качественный признак флавоноидов при тонкослойной хроматографии растительного сырья и лекарственных препаратов. Она позволяет выявлять не только свободные агликоны, но и многие флавоноидные гликозиды, поскольку углеводный компонент не устраняет реакционноспособные участки флавоноидного ядра. Усиление окраски и появление характерной флуоресценции оценивают совместно с величиной Rf и сравнением со стандартным образцом.
Остальные перечисленные реактивы обладают иной преимущественной направленностью. Реактив Драгендорфа предназначен главным образом для обнаружения алкалоидов и других органических оснований, желатин осаждает дубильные вещества, а соли железа(III) выявляют фенольные соединения с образованием синих, зелёных или тёмных комплексов. Эти реакции могут быть полезны для общей характеристики экстракта, но не обеспечивают столь характерного комплексообразования с флавоноидной структурой, как алюминия хлорид.
| Реактив или метод | Основная группа выявляемых веществ | Механизм реакции | Типичный результат на хроматограмме | Диагностическая ценность для флавоноидов |
|---|---|---|---|---|
| Раствор алюминия хлорида | Флавоноиды, особенно флавоны и флавонолы | Хелатирование Al3+ с карбонильной и гидроксильными группами | Жёлтая окраска или усиленная флуоресценция в УФ-свете | Высокая; характерный подтверждающий признак флавоноидного ядра |
| Реактив Драгендорфа | Алкалоиды и другие азотистые основания | Образование ионных ассоциатов с протонированными основаниями | Оранжевые или красно-бурые пятна | Для флавоноидов неспецифичен |
| Желатин | Дубильные вещества | Осаждение вследствие взаимодействия танинов с белком | Помутнение или осадок в растворе | Не является стандартным проявителем флавоноидов |
| Раствор железа(III) аммония сульфата | Фенольные соединения, в том числе танины | Комплексообразование Fe3+ с фенолятными группами | Синяя, зелёная или тёмная окраска | Недостаточно специфичен: возможна реакция с различными фенолами |
| УФ-детектирование при 254 нм | Соединения с сопряжённой π-электронной системой | Поглощение УФ-излучения и тушение флуоресценции сорбента | Тёмные зоны на флуоресцентной пластинке | Предварительное обнаружение, без достаточной специфичности |
| УФ-детектирование при 365–366 нм после AlCl3 | Комплексы флавоноидов с алюминием | Изменение спектра поглощения и флуоресцентных свойств комплекса | Яркие жёлтые или жёлто-зелёные пятна | Особенно информативно для подтверждения флавоноидов |
Интенсивность реакции зависит от строения флавоноида и наличия свободных гидроксильных групп, поэтому отсутствие яркой флуоресценции не всегда исключает данный класс соединений. Для надёжной идентификации используют сопоставление с эталонным веществом, величиной Rf и спектральными характеристиками зоны. В фармакопейном анализе реакцию с алюминия хлоридом рассматривают как качественную реакцию, которую при необходимости дополняют количественным спектрофотометрическим определением.