2) подлинности
3) количественном (+)
4) индивидуальности состава
Калибровочный график применяют для количественного определения лекарственного вещества. Его строят по серии стандартных растворов с точно известными концентрациями, измеряя их оптическую плотность при выбранной длине волны. В пределах линейного диапазона зависимость оптической плотности от концентрации описывается законом Бугера–Ламберта–Бера: чем выше содержание поглощающего вещества в растворе, тем больше измеряемая абсорбция.
После построения графика измеряют оптическую плотность исследуемого раствора и по калибровочной зависимости находят соответствующую концентрацию аналита. Результат пересчитывают с учетом навески, разведения, объема раствора и, при необходимости, коэффициента пересчета на лекарственную форму или субстанцию. Такой подход позволяет определить массовую долю, содержание действующего вещества либо его концентрацию в анализируемом образце.
Подлинность обычно подтверждают качественными реакциями, характером спектра или положением максимума поглощения, а степень чистоты оценивают по содержанию примесей и соответствию установленным предельным нормам. Эти испытания могут включать фотометрические измерения, однако назначение калибровочного графика состоит прежде всего в получении численного значения содержания определяемого компонента.
| Элемент анализа | Назначение или критерий |
|---|---|
| Стандартные растворы | Содержат точно известные концентрации определяемого вещества и служат основой для построения калибровочной зависимости. |
| Оптическая плотность | Измеряется при длине волны, соответствующей максимальному или достаточно интенсивному поглощению аналита. |
| Калибровочная зависимость | Отражает связь между концентрацией вещества и аналитическим сигналом фотоэлектроколориметра. |
| Линейный диапазон | Интервал концентраций, в котором изменение оптической плотности пропорционально содержанию вещества. |
| Холостой раствор | Учитывает поглощение растворителя, реактивов и матрицы, не связанное с определяемым компонентом. |
| Исследуемый образец | Его концентрацию устанавливают по измеренной оптической плотности с использованием графика или уравнения регрессии. |
| Контроль подлинности и чистоты | Проводится по специфическим качественным признакам и нормативам примесей, а не только по величине концентрации основного вещества. |
Надежность количественного результата зависит от правильного приготовления стандартных растворов, стабильности окрашенного соединения и соблюдения одинаковых условий измерения. При построении графика оценивают линейность, воспроизводимость и отсутствие систематического отклонения аналитического сигнала. Концентрация исследуемого раствора должна находиться внутри установленного калибровочного диапазона; при превышении его раствор дополнительно разводят. Современная обработка результатов часто использует уравнение линейной регрессии, которое является математическим выражением калибровочного графика.