2) кислоты хлористоводородной
3) калия перманганата
4) натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята (+)
Количественное определение аскорбиновой кислоты в плодах шиповника основано на окислительно-восстановительном титровании раствором натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята — реактива Тильманса. Аскорбиновая кислота является восстановителем и количественно восстанавливает окрашенную окисленную форму индикатора до бесцветной лейкоформы. После полного связывания аскорбиновой кислоты первая избыточная капля титранта вызывает устойчивое розовое окрашивание раствора в кислой среде, что соответствует конечной точке титрования.
Кислая среда экстрагирования необходима для стабилизации аскорбиновой кислоты и уменьшения её окисления кислородом воздуха; для этой цели применяют, в частности, растворы метафосфорной или уксусной кислоты. Метод отличается достаточной селективностью по отношению к витамину C и удобен для анализа растительного сырья, содержащего сопутствующие фенольные и пигментные вещества. Поэтому правильным является вариант с натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолятом.
Натрия гидроксид и кислота хлористоводородная обеспечивают преимущественно кислотно-основное титрование и не дают специфичной реакции с аскорбиновой кислотой. Калия перманганат также является окислителем, однако его реакция менее селективна: он может взаимодействовать с другими восстановителями экстракта, что приводит к завышению результата. Использование индикаторного окислительно-восстановительного титранта позволяет фиксировать эквивалентную точку непосредственно по изменению окраски.
| Компонент или подход | Химический принцип | Признак конечной точки | Оценка пригодности для определения витамина C |
|---|---|---|---|
| Натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолят | Окисление аскорбиновой кислоты с восстановлением красителя до лейкоформы | Устойчивое розовое окрашивание после добавления избытка титранта | Стандартный и достаточно селективный метод |
| Аскорбиновая кислота | Донор электронов; превращается в дегидроаскорбиновую кислоту | Исчезновение окраски каждой порции титранта до полного расходования восстановителя | Количество рассчитывают по объёму израсходованного титранта |
| Кислая среда экстракта | Стабилизация аскорбиновой кислоты и поддержание воспроизводимого окрашивания реактива | Чёткий переход от бесцветной восстановленной формы к окрашенной окисленной форме | Необходима для повышения точности анализа |
| Натрия гидроксид | Нейтрализация кислот и кислотно-основное титрование | Изменение кислотности, а не специфическое редокс-окрашивание | Не используется для прямого количественного определения аскорбиновой кислоты данным методом |
| Кислота хлористоводородная | Подкисление раствора и реакция с основными компонентами | Изменение pH без эквивалентной реакции с витамином C | Может входить в состав среды, но не является титрантом аскорбиновой кислоты |
| Калия перманганат | Сильное окисление восстановителей | Появление стойкой розово-фиолетовой окраски избытка перманганата | Недостаточно селективен в сложном растительном экстракте |
| Сопутствующие восстановители сырья | Параллельное восстановление окислительного титранта | Увеличение расхода титранта по сравнению с истинным содержанием аскорбиновой кислоты | Особенно значимы при применении неспецифичных окислителей |
Метод Тильманса относится к объёмному редокс-анализу и использует одновременно химическую реакцию и визуальный индикаторный эффект. Его результат зависит от быстрого проведения анализа, защиты экстракта от света и воздуха, а также соблюдения кислой среды. При необходимости подтверждения специфичности применяют инструментальные методы, например высокоэффективную жидкостную хроматографию. Для фармакопейной оценки плодов шиповника ключевыми критериями остаются правильная подготовка извлечения и точная фиксация устойчивого окрашивания в конечной точке.