2) внешнего стандарта
3) внутреннего стандарта
4) нормализации
Правильный ответ — метод стандартных добавок. Его сущность заключается во внесении в анализируемый раствор известного количества того же вещества, содержание которого необходимо определить, с последующим сравнением хроматографического сигнала до и после добавки. Увеличение площади или высоты пика отражает отклик именно на внесённое количество аналита.
При линейной зависимости сигнала от концентрации без учёта изменения объёма исходная проба даёт сигнал S0 = kCx, а раствор после добавки — S1 = k(Cx + Cд). Поэтому концентрацию в исходной пробе можно рассчитать как Cx = CдS0/(S1 − S0); при изменении объёма учитывают соответствующий коэффициент разбавления. На практике часто выполняют несколько последовательных добавок и строят график зависимости сигнала от добавленной концентрации: экстраполяция линии до пересечения с осью концентраций позволяет определить содержание аналита.
Метод особенно важен при анализе сложных матриц, поскольку испытуемый раствор и раствор с добавкой имеют практически одинаковый состав; следовательно, влияние соэкстрактивных веществ, вязкости, рН и других факторов на детектор компенсируется. Внешний стандарт анализируют отдельно и используют для построения градуировочной зависимости, внутренний стандарт вводят в постоянном количестве как эталон для коррекции вариабельности пробоподготовки и инжектирования, а нормализация основана на соотношении площадей пиков компонентов смеси.
| Метод | Принцип | Расчётный сигнал | Учет матричного влияния | Основное применение |
|---|---|---|---|---|
| Стандартных добавок | К пробе добавляют известное количество определяемого вещества и сравнивают отклики | Разность или прирост площади/высоты пика; возможна линейная экстраполяция | Высокий, поскольку матрица сохраняется в каждом измеряемом растворе | Сложные биологические, лекарственные и растительные матрицы |
| Внешнего стандарта | Сигнал пробы сопоставляют с сигналами отдельно приготовленных стандартных растворов | Абсолютная градуировочная зависимость сигнал—концентрация | Ограниченный; различия состава стандартов и пробы могут вызывать систематическую ошибку | Рутинный анализ относительно простых и стабильных растворов |
| Внутреннего стандарта | В каждую пробу и стандарт добавляют постоянное количество другого соединения | Отношение сигнала аналита к сигналу внутреннего стандарта | Частично компенсирует потери при подготовке и колебания объёма инжектирования | Количественная ВЭЖХ и газовая хроматография при вариабельной пробоподготовке |
| Нормализации | Содержание компонента выражают как долю суммы сигналов всех учитываемых компонентов | Площадь пика аналита / сумма площадей пиков × 100% | Не устраняет различия коэффициентов отклика детектора | Оценка относительного состава смесей при полном или почти полном разделении компонентов |
| Многоуровневых стандартных добавок | В одну серию аликвот вносят несколько возрастающих количеств аналита | Наклон и точка пересечения регрессионной прямой с осью концентраций | Позволяет устойчивее учитывать сложную матрицу и проверить линейность | Валидационные и высокоточные количественные определения |
Ключевым диагностическим признаком применения стандартных добавок является увеличение сигнала после внесения известного количества того же аналита при неизменной матрице. Метод требует подтверждённой линейности отклика, корректного разделения пика и контроля воспроизводимости хроматографической системы. Если матричный эффект несущественен, внешняя градуировка обычно проще и экономичнее. Для результатов, полученных стандартными добавками, необходимо учитывать чистоту добавляемого стандарта, точность дозирования и изменение объёма раствора.