2) рефрактометрия
3) фотометрия (+)
4) поляриметрия
Фотометрический метод основан на измерении ослабления электромагнитного излучения при прохождении через исследуемый раствор. Поглощение обусловлено переходом молекул вещества в возбужденное электронное или колебательно-вращательное состояние; величина оптической плотности рассчитывается по формуле A = lg(I0/I), где I0 — интенсивность падающего излучения, а I — интенсивность света после прохождения через образец.
Количественная оценка обычно проводится в соответствии с законом Бугера—Ламберта—Бера: A = εlc. В пределах линейного диапазона оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации вещества, толщине поглощающего слоя и молярному коэффициенту поглощения. В фармацевтическом анализе измерение выполняют на выбранной длине волны, соответствующей максимуму поглощения, непосредственно для окрашенного соединения либо после проведения цветной реакции; концентрацию определяют по стандартному раствору или калибровочному графику.
| Метод | Измеряемый аналитический сигнал | Физическая основа | Типичное применение |
|---|---|---|---|
| Фотометрия | Интенсивность прошедшего или поглощённого света, оптическая плотность | Поглощение электромагнитного излучения молекулами вещества | Количественное определение лекарственных веществ и продуктов цветных реакций |
| Спектрофотометрия | Зависимость оптической плотности от длины волны | Селективное поглощение излучения в ультрафиолетовой, видимой или инфракрасной области | Идентификация, оценка чистоты и количественный анализ лекарственных средств |
| Рефрактометрия | Показатель преломления | Изменение направления распространения света на границе сред | Контроль концентрации растворов, идентификация жидких лекарственных субстанций |
| Поляриметрия | Угол вращения плоскости поляризации | Взаимодействие плоскополяризованного света с оптически активными соединениями | Определение удельного вращения и контроль содержания хиральных веществ, например сахаров |
| Полярография | Сила тока в зависимости от приложенного потенциала | Электрохимическое восстановление или окисление вещества на электроде | Определение электроактивных компонентов и следовых примесей |
Таким образом, ключевым измеряемым параметром в фотометрии является изменение интенсивности светового потока вследствие его поглощения образцом. Метод особенно эффективен при наличии выраженного хромофора или возможности перевести анализируемое вещество в окрашенное производное. На результат влияют длина волны, толщина кюветы, концентрация раствора, прозрачность образца и соблюдение диапазона применимости закона Бугера—Ламберта—Бера.