2) пикриновой кислотой
3) щелочным раствором натрия нитропруссида
4) хлористоводородной кислотой
Положительная реакция с концентрированной серной кислотой является качественной пробой на стероидное ядро — циклопентанпергидрофенантреновую систему из четырёх конденсированных колец. В фармацевтическом анализе её связывают с реакцией Сальковского: при взаимодействии вещества, обычно растворённого в хлороформе, с концентрированной серной кислотой появляются характерные окрашивания в пограничном слое и/или отдельных фазах. Интенсивность и оттенок зависят от строения стероида и наличия функциональных заместителей.
В основе реакции лежат кислотно-катализируемые дегидратация, перегруппировка и окислительно-сульфирующие превращения стероидной системы с образованием сопряжённых хромофорных продуктов. Именно развитая полициклическая структура и способность стероидного ядра образовывать стабилизированные окрашенные катионные или сопряжённые соединения обусловливают аналитический эффект. Проба подтверждает стероидную природу соединения, но не позволяет установить конкретный стероид или точно определить положение функциональных групп.
Пикриновая кислота преимущественно выявляет основные азотсодержащие вещества, образуя малорастворимые пикраты, поэтому специфическим тестом на стероидное ядро не является. Щелочной раствор натрия нитропруссида используется, в частности, в реакции Легаля для выявления карденолидов и связанных с ними структурных фрагментов, а не всех стероидов. Хлористоводородная кислота может образовывать соли с основаниями или вызывать кислотный гидролиз, но самостоятельной специфичности в отношении стероидного цикла не имеет.
| Реакция или реагент | Основной структурный объект | Типичный аналитический признак | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Концентрированная серная кислота, реакция Сальковского | Стероидное ядро, особенно стеролы и родственные соединения | Красная, красно-бурая или другая характерная окраска фаз; иногда флуоресценция | Подтверждает стероидную природу вещества в качественном анализе |
| Уксусный ангидрид и концентрированная серная кислота, реакция Либермана—Бурхарда | Стеролы и сопряжённые ненасыщенные системы | Переход окраски через сине-зелёные или зелёные оттенки | Более специфичная модификация цветной реакции для стерольных соединений |
| Пикриновая кислота | Основные азотсодержащие соединения | Образование жёлтого кристаллического или малорастворимого пикрата | Выявление аминов, алкалоидов и других оснований; не критерий стероидного ядра |
| Щелочной раствор натрия нитропруссида | Активная метиленовая группа и отдельные фрагменты карденолидов | Розовое, красное или пурпурное окрашивание | Реакция Легаля; характеризует определённые сердечные гликозиды, а не стероиды в целом |
| Хлористоводородная кислота | Основные функциональные группы, лабильные связи | Образование солей, растворение или кислотный гидролиз | Общая кислотно-основная или гидролитическая реакция без специфичности к стероидному циклу |
| Тонкослойная хроматография с эталонным образцом | Целое лекарственное вещество и его примеси | Совпадение положения и окраски пятна с референсным стандартом | Подтверждает идентичность соединения и дополняет цветную реакцию |
Результат цветной реакции оценивают только при соблюдении условий методики, поскольку вода, растворитель, концентрация и примеси могут изменять окраску. Для окончательной идентификации лекарственного вещества реакцию с серной кислотой сопоставляют с данными тонкослойной хроматографии, инфракрасной спектроскопии или другого инструментального метода. У положительной пробы диагностически значима совокупность характерного цвета, его распределения между фазами и соответствия реакции стандартному образцу. Таким образом, концентрированная серная кислота является правильным выбором для качественного подтверждения стероидного ядра.