2) стероидной части
3) сахарного остатка
4) метильных групп
Окрашивание при добавлении пикриновой кислоты в щелочной среде является реакцией Балье и указывает на наличие лактонного фрагмента в молекуле сердечного гликозида. Для кардиенолидов характерно α,β-ненасыщенное пятичленное лактонное кольцо, присоединённое к стероидному агликону в положении C17; у буфадиенолидов лактонное кольцо шестичленное и содержит более протяжённую сопряжённую систему. Именно эта ненасыщенная лактонная структура взаимодействует с пикрат-ионом, образующимся в щелочной среде, с формированием окрашенного продукта — обычно оранжево-красного оттенка.
Реакция выявляет не стероидное ядро и не углеводную часть, а специфический реакционноспособный участок агликона. Стероидная часть может подтверждаться реакциями Либермана—Бурхарда или Сальковского, а сахарные остатки — реакциями на углеводы и 2-дезоксисахара, например пробой Молиша или Келлера—Килиани. Метильные группы не являются структурной причиной данного окрашивания и диагностического значения для реакции Балье не имеют.
Механистически в щелочной среде пикриновая кислота превращается в пикратную форму, способную образовывать окрашенный ионный продукт с сопряжённой системой ненасыщенного лактонного кольца. Поэтому интенсивность окраски зависит от концентрации вещества, сохранности лактонного фрагмента, щелочности среды и времени проведения реакции. Положительный результат служит важным качественным признаком сердечных гликозидов, но для окончательной идентификации его сопоставляют с другими цветными реакциями и хроматографическими данными.
| Реакция | Реагенты | Выявляемая структурная часть | Типичная окраска | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Балье | Пикриновая кислота и щёлочь | Ненасыщенное лактонное кольцо | Оранжево-красная | Подтверждает наличие лактонного фрагмента сердечного гликозида |
| Кедде | 3,5-Динитробензойная кислота и щёлочь | α,β-Ненасыщенный лактон | Фиолетовая или пурпурная | Дополнительная реакция на агликон сердечных гликозидов |
| Раймонда | Метадинитробензол и щёлочь | Ненасыщенная лактонная система | Фиолетово-синяя | Используется для подтверждения кардиотонических гликозидов |
| Легаля | Нитропруссид натрия, пиридин и щёлочь | Ненасыщенное лактонное кольцо | Розовая или красная | Качественная реакция на лактонную часть агликона |
| Келлера—Килиани | Ледяная уксусная кислота, FeCl3, концентрированная H2SO4 | 2-Дезоксисахара | Сине-зелёное кольцо на границе слоёв | Характеризует углеводный компонент, а не лактон |
| Молиша | α-Нафтол и концентрированная H2SO4 | Углеводные остатки | Фиолетовое кольцо | Общая проба на наличие сахаров в гликозиде |
| Либермана—Бурхарда | Уксусный ангидрид и концентрированная H2SO4 | Стероидное ядро | Зелёная или сине-зелёная | Подтверждает стероидную природу, но не является специфичной для сердечных гликозидов |
Таким образом, правильный ответ связан с лактонным кольцом, входящим в состав агликона сердечного гликозида. Наиболее информативна именно сохранённая α,β-ненасыщенная лактонная система, поскольку она обеспечивает реакцию с пикратом. Отсутствие окраски не всегда исключает гликозид, если лактон разрушен или изменены условия анализа. Для подтверждения результата применяют совокупность реакций на лактон, стероидное ядро и углеводный компонент.