2) 60
3) 90 (+)
4) 180
Правильный ответ — 90°. В двумерной бумажной хроматографии после завершения первого элюирования и удаления растворителя хроматографическую бумагу поворачивают на четверть оборота. Второй элюент перемещается перпендикулярно направлению первого пробега, поэтому координаты разделения образуют две взаимно независимые оси.
Каждый растворитель обладает собственной полярностью, избирательностью и способностью взаимодействовать с целлюлозой бумаги и компонентами смеси. При последовательном элюировании вещества получают два значения Rf, что существенно повышает разрешающую способность метода и позволяет разделить соединения, имевшие близкие значения Rf в первом направлении. Перпендикулярная ориентация также предотвращает повторное прохождение компонентов по уже использованной зоне и формирует раздельные пятна на плоскости хроматограммы.
Отклонение от прямого угла снижает эффективность двумерного разделения: при параллельном направлении зоны накладываются, а при обратном направлении элюент проходит по тому же пути в противоположную сторону. Поэтому угол 90° является не условным параметром, а геометрическим принципом метода, обеспечивающим независимость второй стадии разделения.
| Этап или параметр | Характеристика | Аналитическое значение |
|---|---|---|
| Нанесение образца | Пробу помещают в исходную точку у края листа | Формируется единый стартовый центр для обоих направлений |
| Первое элюирование | Растворитель перемещается по первой оси | Компоненты разделяются по различию в сродстве к неподвижной и подвижной фазам |
| Высушивание бумаги | Растворитель удаляют до начала второго пробега | Предотвращается смешивание первого и второго элюентов и искажение миграции |
| Поворот хроматограммы | Бумагу ориентируют так, чтобы второе направление составляло 90° к первому | Создаются две независимые координаты разделения |
| Второе элюирование | Используют растворитель с иными физико-химическими свойствами | Дополнительно разделяются вещества с близкими значениями Rf после первого пробега |
| Оценка положения пятен | Учитывают расстояния миграции по обеим осям и рассчитывают два значения Rf | Получается двумерный профиль вещества, пригодный для идентификации |
| Нарушение угла | Параллельное, косое или обратное направление второго пробега | Возникают наложение пятен, снижение разрешения и недостоверная интерпретация результата |
После завершения обоих пробегов пятна выявляют визуально или с помощью специфических реактивов, ультрафиолетового излучения и других средств детекции. Идентификацию проводят по совокупности координат пятна, окраске или флуоресценции и сравнению со стандартным образцом. Метод особенно полезен для анализа сложных смесей лекарственных веществ, растительных экстрактов и продуктов биотрансформации. Надёжность результата зависит от соблюдения одинаковых условий насыщения камеры, состава элюентов, времени развития и направления движения растворителей.