2) показателю преломления испытуемого раствора (+)
3) удельному вращению
4) площадям пиков испытуемого и стандартного растворов
Рефрактометрический анализ основан на измерении показателя преломления раствора — величины, характеризующей изменение направления распространения света при переходе из одной среды в другую. Показатель преломления зависит от природы и концентрации растворённого вещества, поэтому при фиксированных температуре, длине волны и составе растворителя его используют для количественного определения лекарственного вещества.
Содержание рассчитывают по градуировочному графику, справочным таблицам или установленной расчетной формуле, связывающей показатель преломления с концентрацией. Перед измерением учитывают показатель преломления растворителя и влияние вспомогательных веществ; температура особенно важна, поскольку изменение температуры приводит к изменению плотности раствора и, соответственно, результата анализа. При линейной зависимости в рабочем диапазоне увеличение концентрации обычно сопровождается закономерным изменением показателя преломления.
Другие перечисленные характеристики относятся к иным инструментальным методам. Удельный показатель светопоглощения применяют в спектрофотометрии, удельное вращение — в поляриметрии, а площади пиков испытуемого и стандартного растворов — преимущественно в хроматографическом анализе. Поэтому для рефрактометрического определения ключевым аналитическим сигналом является именно показатель преломления испытуемого раствора.
| Метод анализа | Основной измеряемый параметр | Принцип количественной оценки | Типичное применение |
|---|---|---|---|
| Рефрактометрия | Показатель преломления | Расчёт концентрации по градуировочному графику, таблице или формуле | Определение растворённых веществ в относительно простых многокомпонентных системах |
| Спектрофотометрия | Оптическая плотность и удельное светопоглощение | Использование закона Бугера—Ламберта—Бера | Определение веществ, поглощающих свет в выбранной области спектра |
| Поляриметрия | Угол вращения плоскости поляризации и удельное вращение | Расчёт концентрации с учётом длины кюветы, температуры и природы вещества | Анализ оптически активных соединений, например сахаров |
| Хроматография | Площадь или высота пика | Сопоставление сигнала образца со стандартом или построение градуировочной зависимости | Разделение и количественное определение компонентов сложных смесей |
| Ключевой фактор рефрактометрии | Температура измерения | Стандартизация температуры или введение температурной поправки | Повышение воспроизводимости результатов |
| Контроль специфичности | Разность показателей преломления раствора и растворителя | Оценка влияния основы, примесей и вспомогательных веществ | Предупреждение систематической ошибки при анализе препарата |
Рефрактометрия является быстрым физико-химическим методом, не требующим сложной пробоподготовки. Достоверность результата обеспечивается постоянством температуры, корректной калибровкой прибора и использованием подходящего диапазона концентраций. При наличии нескольких растворённых компонентов показатель преломления может отражать их суммарное влияние, поэтому специфичность метода оценивают с учётом состава лекарственной формы. Таким образом, измеренный показатель преломления служит непосредственной основой количественного расчёта.