2) с раствором пикриновой кислоты
3) цианидиновой пробы
4) лактонной пробы
Сапонины — это гликозиды, состоящие из углеводной части и липофильного агликона, или сапогенина; последний может иметь тритерпеновую или стероидную структуру. Концентрированная серная кислота вызывает протонирование и кислотный гидролиз гликозидной связи, а также дегидратацию и конденсацию образующихся продуктов. В результате появляется характерное окрашивание, интенсивность и оттенок которого зависят от строения сапогенина и условий проведения реакции.
Поэтому реакция с концентрированной серной кислотой используется как качественная цветная реакция на сапонины, особенно на стероидные и тритерпеновые соединения. В фармакогностическом анализе ее оценивают вместе с другими признаками: образованием устойчивой пены при встряхивании водного извлечения и гемолитической активностью. Реакция не обладает абсолютной специфичностью, поскольку концентрированная кислота может окрашивать и другие органические вещества, однако среди предложенных вариантов именно она соответствует сапонинам.
Остальные реакции относятся преимущественно к другим группам биологически активных веществ. Пикриновая кислота образует малорастворимые пикраты с алкалоидами, цианидиновая проба выявляет флавоноиды по развитию красной или оранжево-красной окраски в восстановительно-кислой среде, а лактонная проба основана на обратимом раскрытии лактонного кольца кумаринов в щелочной среде.
| Реакция или признак | Основной объект выявления | Химическая основа и диагностический результат |
|---|---|---|
| Концентрированная серная кислота | Сапонины | Кислотный гидролиз и дегидратация гликозидов; развитие желтой, красно-бурой, фиолетовой или зеленоватой окраски в зависимости от сапогенина. |
| Пенная проба | Сапонины | Снижение поверхностного натяжения воды; образование стойкой мелкодисперсной пены, сохраняющейся после встряхивания. |
| Гемолитическая проба | Сапонины | Взаимодействие с мембранами эритроцитов и повышение их проницаемости; появление гемолиза in vitro. |
| Раствор пикриновой кислоты | Алкалоиды | Образование труднорастворимых солей — пикратов, обычно в виде осадка желтого цвета. |
| Цианидиновая проба | Флавоноиды | Восстановление и протонирование флавоноидного ядра в присутствии металлического восстановителя и кислоты; красная или оранжевая окраска. |
| Лактонная проба | Кумарины | Щелочное раскрытие лактонного цикла с образованием окрашенного аниона; окраска ослабевает или исчезает после подкисления. |
Для подтверждения сапонинов в лекарственном растительном сырье целесообразно сочетать цветную реакцию с концентрированной серной кислотой и пенным тестом. Стероидные и тритерпеновые сапонины могут различаться по оттенку реакции и выраженности гемолитического действия. При проведении анализа необходимо соблюдать правила работы с концентрированной серной кислотой, поскольку она вызывает тяжелые химические ожоги и обугливание органических материалов.