2) этинилэстрадиола
3) прогестерона (+)
4) ментола
Реакция с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) основана на конденсации гидразина с карбонильной группой альдегидов и кетонов. В кислой среде образуется соответствующий 2,4-динитрофенилгидразон с фрагментом C=N–NH–Ar; производное обычно имеет интенсивную окраску и может определяться спектрофотометрически. Поэтому метод применим для количественного анализа веществ, содержащих доступную альдегидную или кетонную группу.
Прогестерон является стероидным гормоном класса прогестинов и представляет собой прегн-4-ен-3,20-дион. В его структуре присутствуют две кетонные карбонильные группы, способные вступать в реакцию с 2,4-ДНФГ с образованием окрашенных гидразонных производных. Интенсивность окраски или оптическая плотность реакционной смеси при установленной длине волны связана с концентрацией прогестерона, что позволяет использовать реакцию для его количественного определения.
У метиландростендиола, этинилэстрадиола и ментола имеются гидроксильные группы, но отсутствуют альдегидные или кетонные карбонильные фрагменты, поэтому характерное образование гидразона для них не происходит. Наличие двойной связи, фенольной функции, спиртового гидроксила или этинильного заместителя само по себе не обеспечивает реакции с 2,4-ДНФГ.
| Объект или класс вещества | Ключевая функциональная группа | Реакция с 2,4-ДНФГ | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|
| Прогестерон | Две кетонные группы в положениях 3 и 20 | Образование 2,4-динитрофенилгидразонного производного | Возможен спектрофотометрический количественный анализ |
| Метиландростендиол | Спиртовые гидроксильные группы | Конденсация с 2,4-ДНФГ нехарактерна | Метод не является специфичным способом количественного определения |
| Этинилэстрадиол | Фенольный и спиртовой гидроксилы, этинильный заместитель | Карбонильная группа для образования гидразона отсутствует | Требуются реакции на фенольную или иную подходящую функциональную группу |
| Ментол | Вторичная спиртовая группа | С 2,4-ДНФГ в обычных условиях гидразон не образует | Определяется методами, основанными на свойствах спиртов или терпенового скелета |
| Альдегиды | Группа –CHO | Быстро образуют соответствующие гидразоны | Реакция пригодна для идентификации и, при стандартизации условий, количественного анализа |
| Кетоны | Группа >C=O | Образуют 2,4-динитрофенилгидразоны | Положительная реакция указывает на наличие карбонильного соединения, но требует подтверждения специфичности |
Таким образом, выбор прогестерона определяется не его стероидной природой как таковой, а наличием реакционноспособных кетонных групп. Окрашенное гидразонное производное служит аналитической формой вещества, удобной для фотометрической регистрации. Реакция не является абсолютно специфичной для прогестерона, поскольку аналогично реагируют другие альдегиды и кетоны. Поэтому в фармацевтическом анализе ее используют при контролируемых условиях, с учетом экстракции, возможных примесей и подтверждения специфичности методики.