2) высокоэффективной жидкостной хроматографией
3) гравиметрическим методом
4) спектрофотометрическим методом (+)
В листьях толокнянки лекарственно значимой группой являются фенольные гликозиды, прежде всего арбутин и метиларбутин, относящиеся к производным гидрохинона. При фармакопейной стандартизации их содержание обычно выражают в пересчёте на арбутин. Спектрофотометрический метод основан на измерении оптической плотности извлечения в ультрафиолетовой области, где ароматическая система производных гидрохинона поглощает излучение; количественная зависимость между absorbance и концентрацией описывается законом Бугера—Ламберта—Бера.
Метод позволяет быстро определить суммарное содержание нормируемых гидрохиноновых производных в растительном сырье после стандартной экстракции и, если предусмотрено нормативной документацией, соответствующей пробоподготовки. Результат сопоставляют с калибровочным раствором арбутина либо рассчитывают по установленной методике и пересчитывают на абсолютно сухое сырьё. Поэтому именно спектрофотометрия является регламентированным способом оценки качества листьев толокнянки, тогда как более сложные методы могут применяться для исследовательского анализа или дополнительной идентификации отдельных соединений.
| Метод | Аналитический принцип | Применение к листьям толокнянки | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Спектрофотометрический | Измерение поглощения света фенольными соединениями в определённом диапазоне длин волн | Количественное определение суммы гидрохиноновых производных в пересчёте на арбутин | Результат может отражать суммарный сигнал группы веществ, а не концентрацию каждого компонента |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Разделение компонентов на сорбенте с последующим детектированием | Раздельное определение арбутина, метиларбутина и других фенольных соединений | Более сложная аппаратура, пробоподготовка и калибровка; не является основным фармакопейным методом для данного показателя |
| Фотоэлектроколориметрический | Измерение интенсивности окраски продукта химической реакции в видимой области спектра | Может использоваться для отдельных окрашенных реакций в лабораторной практике | Для нормативного определения арбутина в листьях толокнянки специфичность и воспроизводимость недостаточны |
| Гравиметрический | Выделение и взвешивание осадка или сухого остатка | Для стандартизации гидрохиноновых гликозидов практически не используется | Невозможно надёжно отделить целевые вещества от сопутствующих экстрактивных компонентов |
| Нормируемый показатель | Содержание биологически активной группы с использованием унифицированной методики | Сумма производных гидрохинона, выраженная в арбутиновых единицах | Оценивается соответствие сырья нормативу, а не фармакологическая активность препарата in vivo |
| Фармакогностическое значение | Связь количественного анализа с диагностической ценностью сырья | Подтверждение доброкачественности и достаточного содержания соединений, определяющих уроантисептическое действие | Количественный анализ не заменяет макро- и микроскопическую идентификацию растения |
Арбутин в организме подвергается гидролизу с образованием гидрохинона, которому связывают уроантисептический эффект препаратов толокнянки при щелочной реакции мочи. Поэтому контроль его содержания имеет одновременно фармакопейное и фармакотерапевтическое значение. Для достоверного результата учитывают влажность сырья, полноту извлечения и соблюдение условий измерения. Спектрофотометрический анализ должен проводиться после подтверждения подлинности сырья и оценки его доброкачественности.