2) боратный буфер
3) натрий-боратный буфер
4) фосфат-боратный буфер
Для разделения фенотерола и сальбутамола методом капиллярного зонного электрофореза используют трис-буфер, который выполняет функцию фонового электролита. Оба лекарственных вещества относятся к β2-адреномиметикам и содержат основную аминогруппу; в условиях выбранного значения pH она преимущественно протонирована. Поэтому молекулы перемещаются в электрическом поле как катионы, а разделение определяется различиями их эффективной электрофоретической подвижности, зависящей от заряда, гидродинамического размера, сольватации и взаимодействия со стенками капилляра.
Трис-буфер поддерживает стабильное значение pH и ионную силу раствора, обеспечивая воспроизводимое формирование зон и электроосмотического потока. Он характеризуется относительно слабым специфическим взаимодействием с фенотеролом и сальбутамолом, поэтому различия в подвижности сохраняются и могут быть зарегистрированы, как правило, методом УФ-детектирования. Боратные системы способны дополнительно взаимодействовать с фенольными и спиртовыми гидроксильными группами анализируемых веществ с образованием комплексных форм; это изменяет эффективный заряд и подвижность соединений и не соответствует условиям рассматриваемой методики.
| Система | Химическая характеристика | Влияние на разделение |
|---|---|---|
| Трис-буфер | Буфер на основе трис(гидроксиметил)аминометана; поддерживает слабощелочную реакцию среды | Обеспечивает воспроизводимую ионизацию основных центров и различие электрофоретической подвижности фенотерола и сальбутамола |
| Фенотерол | Основной β2-адреномиметик с несколькими гидроксильными группами | В буфере существует преимущественно в катионной форме; скорость миграции определяется зарядом, размером и сольватацией |
| Сальбутамол | Основной β2-адреномиметик с третичной аминогруппой и фенольными гидроксильными группами | Мигрирует как катион с подвижностью, отличной от фенотерола вследствие структурных различий молекул |
| Боратный буфер | Содержит борную кислоту и сопряжённые боратные формы | Может образовывать комплексы с соседними гидроксильными группами, изменяя заряд и селективность разделения |
| Натрий-боратный буфер | Щелочная боратная система с ионами натрия | Обладает тем же принципиальным ограничением: комплексообразование может приводить к иной миграции аналитов |
| Фосфатно-боратный буфер | Комбинированная буферная система с фосфатными и боратными ионами | Изменяет ионную силу, комплексообразование и электроосмотический поток; не является электролитом данной стандартной методики |
Таким образом, правильный выбор определяется не только поддержанием проводимости раствора, но и требуемой селективностью к двум близким по фармакологическому действию соединениям. Трис-буфер создаёт условия для устойчивого существования фенотерола и сальбутамола в катионной форме и их разделения по подвижности. Боратные электролиты могут существенно менять миграцию за счёт комплексообразования с гидроксильными группами, поэтому их применение относится к другим методическим вариантам. Валидность разделения оценивают по разрешению пиков, времени миграции и воспроизводимости аналитического сигнала.