2) культивирование при комнатной температуре
3) анаэробные условия культивирования
4) необходимость в предварительной обработке диагностического материала (+)
Культуральное выявление микобактерий туберкулёза начинается с обязательной предварительной обработки диагностического материала, особенно мокроты и других нестерильных образцов. Она включает разжижение и гомогенизацию вязкого материала, деконтаминацию от сопутствующей бактериальной флоры и, при необходимости, концентрирование осадка центрифугированием. Часто применяют систему NALC–NaOH: муколитик разрушает слизистые компоненты, а гидроксид натрия подавляет большинство быстрорастущих микроорганизмов; микобактерии благодаря особенностям липидсодержащей клеточной стенки относительно устойчивы к этой процедуре.
Без такой обработки посторонняя микрофлора может быстро размножиться на питательной среде, подавить рост микобактерий и привести к контаминации посева или ложноотрицательному результату. После подготовки материал засевают на плотные среды, например Лёвенштейна–Йенсена или Middlebrook, либо в жидкие автоматизированные системы. Микобактерии туберкулёзного комплекса являются медленнорастущими строгими аэробами и оптимально культивируются примерно при 35–37 °C, поэтому культуральный метод не относится к быстрым, а комнатная температура и анаэробные условия не являются стандартными условиями их выращивания.
| Этап или признак | Практическое содержание | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Получение материала | Предпочтительна качественная утренняя мокрота; также исследуют бронхоальвеолярный лаваж, промывные воды, мочу, ликвор, биоптаты | Репрезентативность образца определяет чувствительность посева |
| Разжижение и гомогенизация | Разрушение слизистых сгустков и равномерное распределение микобактерий в образце | Повышается вероятность попадания возбудителя в исследуемую порцию |
| Деконтаминация | Подавление сопутствующей микрофлоры с использованием щёлочных или иных валидированных реагентов | Предотвращает зарастание питательной среды посторонними бактериями и грибами |
| Концентрирование | Центрифугирование обработанного материала с последующим использованием осадка для посева | Особенно важно при низкой бактериальной нагрузке и paucibacillary-течении заболевания |
| Культивирование | Посев на плотные или жидкие среды, инкубация в аэробных условиях при 35–37 °C | Рост на плотной среде обычно занимает несколько недель; жидкие системы позволяют получить сигнал раньше |
| Подтверждение и тестирование | Идентификация комплекса M. tuberculosis молекулярными или биохимическими методами с последующим определением лекарственной чувствительности | Культура подтверждает наличие жизнеспособного возбудителя и позволяет выполнить фенотипическое тестирование лекарственной устойчивости |
Отрицательный посев не исключает туберкулёз, поскольку результат зависит от бактериальной нагрузки, качества сбора материала и соблюдения технологии обработки. При малом количестве микобактерий целесообразно исследовать несколько образцов и одновременно применять молекулярно-генетические методы. Преимущество культуры сохраняется в возможности получить жизнеспособный изолят и непосредственно определить его чувствительность к противотуберкулёзным препаратам.