2) посева биологического материала на жидкую питательную среду (+)
3) полимеразной цепной реакции
4) посева биологического материала на плотную питательную среду
Лекарственная чувствительность микобактерий к пиразинамиду определяется фенотипическим методом в жидкой питательной среде, наиболее часто в автоматизированной системе MGIT. Пиразинамид проявляет активность преимущественно в кислой среде, где он превращается бактериальной пиразинамидазой в пиразиновую кислоту — активный метаболит, нарушающий энергетический обмен микобактерий. В таких условиях рост Mycobacterium tuberculosis на плотных средах выражен недостаточно, поэтому жидкая система обеспечивает более стандартизированное выявление роста при наличии препарата и позволяет оценить результат по установленным критериям.
Микроскопия показывает наличие кислотоустойчивых микобактерий, но не позволяет определить их лекарственную чувствительность. Полимеразная цепная реакция может выявлять мутации, прежде всего в гене pncA, ассоциированные с устойчивостью к пиразинамиду, однако молекулярный результат не всегда заменяет фенотипическое исследование: спектр мутаций широк, а не все варианты генетических изменений имеют однозначно установленное клиническое значение. Посев на плотную среду для пиразинамида считается методологически менее надежным из-за слабого роста культуры при необходимом кислом pH и более длительного получения результата.
Таким образом, жидкостное фенотипическое тестирование позволяет непосредственно оценить способность микобактерий расти в присутствии пиразинамида. Исследование проводят на выделенной чистой культуре с использованием стандартизированных условий, концентрации препарата и контрольных образцов. Полученный результат учитывают при формировании режима лечения лекарственно-чувствительного или лекарственно-устойчивого туберкулеза.
| Метод | Что определяется | Значение для оценки чувствительности к пиразинамиду |
|---|---|---|
| Микроскопия мазка | Наличие кислотоустойчивых микобактерий и ориентировочная бактериальная нагрузка | Не определяет чувствительность к препаратам |
| Посев на жидкую среду | Рост микобактерий в присутствии пиразинамида в стандартизированных условиях | Основной фенотипический метод; применяется, в частности, в системе MGIT |
| Посев на плотную среду | Рост культуры и ее выделение | Для пиразинамида менее надежен из-за слабого роста при кислом pH и длительного получения результата |
| ПЦР с выявлением мутаций pncA | Генетические маркеры возможной устойчивости | Полезна для быстрого молекулярного тестирования, но не полностью заменяет фенотипическую проверку |
| Определение пиразинамидазной активности | Способность микобактерий превращать пиразинамид в активную пиразиновую кислоту | Исторически использовалось как косвенный показатель, но не является стандартным основным методом рутинной лекарственной чувствительности |
| Интерпретация фенотипического теста | Наличие или отсутствие роста при критической концентрации препарата | Рост в присутствии пиразинамида расценивается как признак фенотипической устойчивости |
Пиразинамид имеет особые требования к проведению теста чувствительности, отличающиеся от многих других противотуберкулезных препаратов. Результаты следует интерпретировать только при наличии адекватного контроля роста и соблюдении стандартизированных условий инкубации. Выявление мутаций pncA может ускорить принятие клинического решения, но отрицательный молекулярный результат не исключает устойчивость. Окончательная тактика лечения определяется совокупностью данных микробиологического, молекулярно-генетического и клинического обследования.