2) люминесцентной микроскопии
3) посева на плотную среду
4) посева на жидкую среду
Наиболее малое количество микобактерий в патологическом материале выявляется методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод основан на многократном копировании специфического участка ДНК микобактерий, например последовательностей комплекса Mycobacterium tuberculosis. Благодаря амплификации даже небольшого числа исходных копий нуклеиновой кислоты становится возможной регистрация возбудителя при малой бактериальной нагрузке, когда микроскопия и культуральные методы могут дать отрицательный результат.
Чувствительность ПЦР особенно важна при малобациллярных формах туберкулёза, внелёгочных локализациях и исследовании небольших объёмов материала. При этом ПЦР выявляет ДНК, поэтому не всегда позволяет отличить жизнеспособные микобактерии от погибших; для подтверждения жизнеспособности возбудителя и определения лекарственной чувствительности необходим посев. Результат также зависит от качества забора и подготовки образца, наличия ингибиторов амплификации и правильного выбора генетической мишени.
Люминесцентная микроскопия требует значительно большей концентрации микобактерий в образце и зависит от визуального обнаружения кислотоустойчивых бактерий. Культуральные методы обладают высокой диагностической ценностью, но требуют наличия жизнеспособных микобактерий и более длительного времени исследования; жидкая среда обычно ускоряет рост по сравнению с плотной. Таким образом, именно молекулярная амплификация обеспечивает наиболее низкий аналитический предел обнаружения среди перечисленных подходов.
| Метод | Что выявляет | Возможность обнаружения при низкой бактериальной нагрузке | Основное диагностическое значение | Ограничения |
|---|---|---|---|---|
| ПЦР | Специфические участки ДНК микобактерий | Очень высокая; возможна регистрация единичных или небольшого числа генетических мишеней | Быстрое подтверждение наличия микобактериальной ДНК, иногда выявление генетических маркеров устойчивости | Не подтверждает жизнеспособность возбудителя; возможны ингибирование реакции и контаминация |
| Люминесцентная микроскопия | Кислотоустойчивые микобактерии после окраски флуорохромами | Низкая при малом количестве возбудителя; требуется более высокая концентрация бактерий | Быстрый скрининг бактериовыделения | Не позволяет надёжно определить вид микобактерий и лекарственную чувствительность |
| Посев на плотную среду | Жизнеспособные микобактерии, формирующие колонии | Высокая, но результат зависит от количества живых бактерий и длительности инкубации | Выделение культуры, идентификация и последующее тестирование чувствительности | Медленный рост; возможны подавление сопутствующей флорой и ложноотрицательный результат после лечения |
| Посев на жидкую среду | Жизнеспособные микобактерии по признакам роста в системе культивирования | Высокая; обычно быстрее регистрирует рост, чем плотная среда | Ускоренное культуральное подтверждение и получение материала для тестирования чувствительности | Требует жизнеспособного возбудителя, специального оборудования и строгого контроля контаминации |
| Количественная ПЦР | Количество копий целевой нуклеиновой кислоты | Позволяет не только обнаружить, но и приблизительно оценить микобактериальную нагрузку | Мониторинг содержания генетического материала в исследуемом образце | Количество копий ДНК не равно числу жизнеспособных микобактерий |
| Интерпретация отрицательного результата | Отсутствие выявляемого сигнала конкретным методом | Не исключает туберкулёз при малом объёме или неправильном заборе материала | Требует сопоставления с клиническими, лучевыми, гистологическими и эпидемиологическими данными | При сохраняющемся подозрении необходимы повторное или альтернативное исследование |
Положительный результат ПЦР следует оценивать вместе с клинической картиной и данными визуализации. При подозрении на лекарственно-устойчивый туберкулёз молекулярное выявление мутаций должно быть дополнено культуральным или молекулярно-генетическим тестированием чувствительности. Отрицательная ПЦР не исключает заболевание при недостаточном количестве материала или преимущественно тканевом поражении. Оптимальная диагностика часто предусматривает сочетание ПЦР, микроскопии, посева и морфологического исследования.