2) усиливают реакцию гемагглютинации
3) ингибируют реакцию гемагглютинации (+)
4) не влияют на реакцию гемагглютинации
Фенотипирование эритроцитов основано на реакции антигенов эритроцитарной мембраны со специфическими антисыворотками или моноклональными реагентами. Для формирования видимой гемагглютинации необходимо достаточное количество интактных эритроцитов, на поверхности которых сохранены антигенные детерминанты. При гемолизе часть клеток разрушается, эритроцитарная суспензия становится неоднородной, поэтому число клеток, способных участвовать в решётчатом взаимодействии антиген—антитело , уменьшается.
Высвобождающиеся гемоглобин и компоненты эритроцитарной стромы дополнительно ухудшают визуальную и инструментальную оценку реакции. В результате агглютинация может быть слабой, неполной или не регистрироваться, что соответствует ингибированию гемагглютинации в лабораторном смысле и создаёт риск ложноотрицательной оценки антигена. Поэтому отсутствие агглютинации в гемолизированном образце нельзя достоверно трактовать как отсутствие соответствующего антигена.
При выраженном гемолизе образец следует считать непригодным для надёжного серологического фенотипирования и исследование повторить из правильно взятой крови, преимущественно с антикоагулянтом ЭДТА. Результат оценивают с учётом положительных и отрицательных контролей, данных о недавней гемотрансфузии и возможной аутоагглютинации. Если пациент недавно получал эритроцитсодержащие компоненты, серологическое типирование может отражать смесь собственных и донорских клеток; в такой ситуации предпочтительно рассмотреть генотипирование эритроцитарных антигенов.
| Состояние образца или клеток | Влияние на реакцию | Диагностическое значение и тактика |
|---|---|---|
| Негемолизированная кровь, достаточная клеточная концентрация | Формируется чёткая специфическая агглютинация | Фенотипирование обычно достоверно при наличии соответствующих контролей |
| Умеренный гемолиз | Реакция ослабевает, становится неоднородной и трудной для визуальной оценки | Возможен ложноотрицательный результат; желательно повторное исследование |
| Выраженный гемолиз | Существенно уменьшается число интактных эритроцитов, фон образца искажается | Образец бракуют; кровь берут повторно |
| Аутоагглютинация или холодовые аутоантитела | Неспецифическое склеивание клеток может имитировать агглютинацию | Результат считают сомнительным; оценивают прямой антиглобулиновый тест и проводят исследование в подходящих температурных условиях |
| Недавняя трансфузия эритроцитов | Возможна смешанная популяция клеток и картина mixed-field | Серологический фенотип может быть недостоверным; учитывают трансфузионный анамнез, при необходимости выполняют генотипирование |
| Слабая экспрессия антигена или редкий вариант антигенной системы | Агглютинация физиологически слабая, но клетки не должны быть гемолизированы | Используют валидированные реагенты, контрольные тесты и подтверждающие методы |
| Липемия, иктеричность или выраженное загрязнение образца | Преимущественно затрудняется визуальная или фотометрическая регистрация реакции | При несоответствии результатов образец повторяют и исключают преаналитические помехи |
Гемолиз является прежде всего преаналитическим фактором, снижающим аналитическую надёжность фенотипирования. Слабую реакцию в таком образце не следует использовать для окончательного определения антигенного профиля. Наиболее безопасная тактика — повторный забор материала и сопоставление результатов с трансфузионным анамнезом и контрольными реакциями. При невозможности получить достоверный серологический результат применяют молекулярное определение эритроцитарных антигенов.