2) только в костном мозге, периферической крови и биологических жидкостях
3) только в костном мозге
4) в любой клеточной взвеси (+)
Иммунофенотипирование методом проточной цитометрии основано на анализе отдельных клеток, находящихся в суспензии. Клетки последовательно проходят через лазерный луч; регистрируются параметры светорассеяния и интенсивность свечения флуорохромов, связанных с моноклональными антителами к поверхностным или внутриклеточным антигенам. Поэтому метод принципиально не ограничен кровью или костным мозгом: исследованию может подвергаться любая клеточная взвесь, в которой сохранены диагностически значимые клетки.
Материалом служат периферическая кровь, костный мозг, аспираты и диссоциированные фрагменты лимфатических узлов или других тканей, ликвор, серозные, синовиальные и другие биологические жидкости. Твердая ткань предварительно измельчается и подвергается механической или ферментативной диссоциации до получения одноклеточной суспензии. Достоверность результата зависит от достаточного количества клеток, их жизнеспособности, сохранности антигенов, отсутствия выраженной агрегации и правильного выбора панели антител.
В гематологии такой подход позволяет выявлять клональные популяции при острых лейкозах и лимфомах, характеризовать плазматические клетки, оценивать минимальную остаточную болезнь и обнаруживать патологическую экспрессию антигенов, например при пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Набор маркеров определяется предполагаемой патологией и видом исследуемого материала, а интерпретация проводится с учетом клинических данных и морфологии.
| Исследуемый материал | Примеры диагностического применения | Особенности подготовки и интерпретации |
|---|---|---|
| Периферическая кровь | Иммунологическая характеристика лимфоцитов, диагностика хронических лимфопролиферативных заболеваний, выявление ПНГ-клона | Оцениваются лейкоцитарные субпопуляции; важно учитывать лейкопению и возможное разрушение клеток |
| Костный мозг | Диагностика острых лейкозов, плазмоклеточных неоплазий, оценка минимальной остаточной болезни | Желательно исследовать свежий аспират до длительного хранения и обработки |
| Лимфатический узел и другая ткань | Иммунофенотипирование лимфом и неопухолевых лимфоидных инфильтратов | Ткань диссоциируют до одноклеточной суспензии; часть материала целесообразно направлять на гистологию |
| Ликвор | Выявление нейролейкоза и поражения центральной нервной системы при лимфопролиферативных заболеваниях | Из-за низкой клеточности необходимы быстрая доставка, концентрирование и контроль клеточных потерь |
| Серозные жидкости | Оценка лимфоидных или миелоидных опухолевых клеток в плевральном, перитонеальном и перикардиальном выпоте | Следует отличать опухолевую популяцию от реактивных клеток и учитывать клеточный фон |
| Синовиальная жидкость | Исследование воспалительного клеточного состава и поиск патологической лимфоидной популяции | Может потребоваться удаление сгустков и разбавление вязкого материала |
| Диссоциированная клеточная суспензия из иного биоматериала | Исследование опухолевых или иммунных клеток при различных заболеваниях | Критичны репрезентативность суспензии, жизнеспособность клеток и сохранение эпитопов |
Проточная цитометрия требует именно клеточного материала, а не цельного фрагмента ткани или бесклеточной жидкости. Метод дополняет, но не заменяет морфологическое, цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследование. Для оценки минимальной остаточной болезни особенно важны стандартизированные панели, чувствительность метода и сопоставление с исходным иммунофенотипом опухоли. Таким образом, правильность широкого ответа определяется универсальностью метода при наличии качественной клеточной суспензии.