2) возможно при достаточной клеточности образца (+)
3) возможно только после предварительной фиксации материала формалином
4) возможно только после дополнительной обработки материала антикоагулянтами
Иммунофенотипирование плеврального выпота методом проточной цитометрии выполнимо, если в образце содержится достаточное количество неповреждённых жизнеспособных клеток. Метод особенно информативен при подозрении на лимфопролиферативное заболевание: он позволяет определить линейную принадлежность клеток, степень их зрелости, наличие аберрантной экспрессии антигенов и клональность В-клеточной популяции по ограничению экспрессии лёгких цепей иммуноглобулинов.
Перед исследованием материал обычно центрифугируют, при необходимости проводят лизис эритроцитов и отмывку, после чего клетки окрашивают панелями моноклональных антител. Предпочтителен свежий образец с хорошей сохранностью клеток и быстрой доставкой в лабораторию; антикоагулянт может применяться для предотвращения свертывания, но не является условием, без которого исследование принципиально невозможно. Формалиновая фиксация для стандартной проточной цитометрии нежелательна, поскольку вызывает сшивание белков, изменяет доступность поверхностных эпитопов и не позволяет корректно оценить жизнеспособность клеток.
Главное ограничение метода — низкая клеточность, выраженная дегенерация клеток или их быстрое разрушение в плевральной жидкости. Поэтому отрицательный результат при малом количестве клеток не исключает лимфому или лейкоз и должен оцениваться вместе с цитологией, гистологией, иммуногистохимией и клиническими данными.
| Ситуация или популяция клеток | Типичные результаты проточной цитометрии | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Реактивный лимфоцитарный выпот | Поликлональная В-клеточная популяция, относительно сохранный и неоднородный Т-клеточный профиль | Поддерживает воспалительную или иммунную реакцию, но сам по себе не исключает опухолевого процесса |
| В-клеточная лимфома | Клональная экспрессия одной лёгкой цепи κ или λ, аберрантное сочетание CD19, CD20, CD5, CD10, CD23 и других маркеров | Позволяет подтвердить наличие клональной В-клеточной популяции и ориентировочно определить её иммунophenотип |
| Т-клеточная неоплазия | Аберрантная потеря или усиление CD3, CD5, CD7, необычное соотношение CD4/CD8 либо патологическая однородность популяции | Может указывать на Т-клеточную лимфому при сопоставлении с морфологией и клиникой |
| Острый лейкоз или бластная популяция | Экспрессия маркеров незрелости CD34, TdT и антигенов миелоидной или лимфоидной линии | Помогает установить наличие и принадлежность бластных клеток |
| Низкая клеточность образца | Недостаточное число информативных событий, преобладание разрушенных или дегенерирующих клеток | Повышает риск ложноотрицательного результата и требует осторожной интерпретации |
| Неподходящая фиксация формалином | Снижение доступности антигенов, нарушение оценки жизнеспособности и параметров светорассеяния | Ограничивает применение стандартного протокола проточной цитометрии |
| Сопоставление с другими методами | Результаты проточной цитометрии сравнивают с цитологией, клеточным блоком, иммуногистохимией и молекулярными тестами | Комплексная оценка необходима для окончательной классификации лимфоидной неоплазии |
Таким образом, диагностическая ценность исследования определяется не самим фактом наличия плевральной жидкости, а количеством и качеством содержащихся в ней клеток. Для повышения выявляемости опухолевой популяции материал следует направлять в лабораторию максимально быстро и не подвергать формалиновой фиксации. Обнаружение клональной или аберрантной популяции является важным признаком, однако окончательный диагноз устанавливают с учётом морфологических и клинических данных.providername