2) радиоиммунные
3) химические
4) физические
Для выявления циркулирующих антитромбоцитарных антител применяют иммунологические методы, основанные на специфическом взаимодействии антител сыворотки пациента с антигенами тромбоцитов или их гликопротеинами. К основным относятся MAIPA и иммуноферментный анализ (ИФА). Наиболее часто антитела направлены против гликопротеинов мембраны тромбоцитов GPIIb/IIIa, GPIb/IX и других антигенных структур, включая HPA-систему.
Метод MAIPA (monoclonal antibody immobilization of platelet antigens) позволяет определить не только наличие антител, но и их специфичность к определённому тромбоцитарному гликопротеину. Тромбоциты инкубируют с сывороткой пациента, затем иммунные комплексы фиксируют с помощью моноклональных антител; связанные иммуноглобулины выявляют ферментной меткой. При ИФА антиген или очищенный тромбоцитарный гликопротеин иммобилизуют на планшете, после чего связывают антитела пациента и регистрируют реакцию ферментмеченым антиглобулиновым конъюгатом по интенсивности окрашивания.
| Метод | Что выявляет | Принцип | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|---|
| MAIPA | Антитела к определённым гликопротеинам тромбоцитов | Иммобилизация антигенсодержащих комплексов моноклональными антителами с последующей ферментной детекцией иммуноглобулина | Высокая специфичность; особенно важен для диагностики аллоиммунизации, неонатальной аллоиммунной тромбоцитопении и уточнения аутоантител |
| Антиген-специфический ИФА | Циркулирующие IgG к тромбоцитарным антигенам или гликопротеинам | Связывание антител с иммобилизованным антигеном и регистрация реакции ферментмеченым анти-IgG | Подходит для скрининга и количественной оценки; результат зависит от набора антигенов и качества контроля |
| Непрямая проточная цитометрия | Антитела сыворотки, связавшиеся с донорскими тромбоцитами | Инкубация тромбоцитов с сывороткой пациента и выявление связанных IgG флуоресцентным антиглобулиновым реагентом | Высокая аналитическая чувствительность, но ограниченная антигенная специфичность без дополнительных панелей клеток |
| Прямая проточная цитометрия | Антитела, уже фиксированные на тромбоцитах пациента | Определение уровня тромбоцит-ассоциированного IgG непосредственно на клеточной мембране | Отражает иммунное покрытие тромбоцитов, но не всегда различает аутоантитела и неспецифическое связывание |
| Радиоиммунологические методы | Иммуноглобулины, взаимодействующие с антигеном | Использование радиоактивной метки для регистрации иммунного комплекса | Имеют историческое значение и технически могут применяться, однако из-за радиационной безопасности и сложной инфраструктуры не относятся к основным современным методам |
| Химические и физические методы | Физико-химические свойства образца | Не предусматривают специфического распознавания антигеном антитела | Не позволяют надёжно идентифицировать циркулирующие антитромбоцитарные антитела и не используются как самостоятельная классификация таких тестов |
Положительный результат MAIPA или ИФА подтверждает наличие антител, но сам по себе не устанавливает диагноз иммунной тромбоцитопении. Результаты необходимо сопоставлять с количеством тромбоцитов, клиническими проявлениями, лекарственным анамнезом, данными о беременности и переливаниях компонентов крови. Отрицательный тест также не исключает иммунный механизм, поскольку концентрация антител может быть ниже порога обнаружения, а антитела способны преимущественно находиться на поверхности тромбоцитов.