2) размер существенной части эритроцитов не позволяет провести точный подсчет при цитометрическом исследовании
3) цитометрическое определение ПНГ-клона среди эритроцитов технически сложно и плохо воспроизводимо
4) результат определения ПНГ-клона среди эритроцитов зависит от проведения гемотрансфузий (+)
Определение размера клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) по эритроцитарной популяции может давать искажённый результат после трансфузий эритроцитсодержащих компонентов. Донорские эритроциты имеют нормальную экспрессию гликозилфосфатидилинозитол-связанных (GPI-связанных) белков, прежде всего CD55 и CD59, и при проточной цитометрии учитываются вместе с собственными клетками пациента. В результате доля GPI-дефицитных эритроцитов искусственно уменьшается и перестаёт точно отражать истинный размер патологического гемопоэтического клона.
Дополнительным фактором недооценки эритроцитарного ПНГ-клона является селективный комплемент-опосредованный гемолиз собственных GPI-дефицитных эритроцитов, особенно клеток III типа с полной утратой защитных белков комплемента. Поэтому для наиболее объективной количественной оценки клона преимущественно исследуют нейтрофилы и моноциты: эти клетки не подвергаются характерному для ПНГ внутрисосудистому гемолизу, а переливание эритроцитов непосредственно не изменяет их процентное соотношение. Международные рекомендации по проточной цитометрии рассматривают определение ПНГ-клона в лейкоцитарных линиях как более надёжный показатель его истинного размера.
| Исследуемая популяция | Цитометрические признаки | Значение для оценки ПНГ-клона |
|---|---|---|
| Эритроциты | Снижение или отсутствие CD55/CD59 | Размер клона может быть занижен вследствие гемолиза и гемотрансфузий |
| Эритроциты после трансфузии | Присутствует значительное количество нормальных донорских клеток | Доля ПНГ-клеток искусственно уменьшается |
| ПНГ-эритроциты II типа | Частичный дефицит GPI-связанных белков | Менее выраженная чувствительность к комплемент-опосредованному лизису |
| ПНГ-эритроциты III типа | Практически полное отсутствие GPI-связанных белков | Наиболее чувствительны к комплемент-опосредованному гемолизу |
| Нейтрофилы | Оценка с применением FLAER и GPI-связанных маркеров, например CD24 | Предпочтительная популяция для оценки истинного размера клона |
| Моноциты | Оценка с применением FLAER и маркеров, например CD14 | Дополняет исследование нейтрофильного клона и повышает достоверность диагностики |
Таким образом, эритроцитарный анализ остаётся важной частью диагностики ПНГ и позволяет характеризовать GPI-дефицитные клетки, однако его количественная интерпретация требует учёта трансфузионного анамнеза. Для определения истинной величины ПНГ-клона основное значение имеет анализ гранулоцитов и моноцитов. Сопоставление нескольких клеточных линий также помогает отличить биологические особенности заболевания от изменений, обусловленных гемолизом или заместительной трансфузионной терапией.