2) общий анализ мочи
3) определение содержания ЛДГ в крови
4) многоцветная проточная цитометрия периферической крови (+)
Золотым стандартом диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) является многоцветная проточная цитометрия периферической крови с выявлением ПНГ-клона. Заболевание обусловлено приобретённой мутацией гена PIGA в гемопоэтической стволовой клетке, из-за чего нарушается синтез гликозилфосфатидилинозитольного (GPI) якоря. В результате на клеточной поверхности отсутствуют или резко снижены GPI-связанные белки, прежде всего CD55 и CD59, защищающие эритроциты от комплемент-опосредованного лизиса.
При исследовании оценивают гранулоциты и моноциты, поскольку размер ПНГ-клона в этих популяциях наиболее достоверен; дополнительно анализируют эритроциты. Высокочувствительная методика с использованием FLAER, связывающегося с GPI-якорем, и антител к нескольким GPI-связанным маркерам позволяет подтвердить дефицит этих белков и количественно определить размер клона. Анализ эритроцитов может занижать его величину вследствие внутрисосудистого гемолиза и недавних гемотрансфузий.
Цитологическое исследование крови не имеет специфических признаков ПНГ, а общий анализ мочи выявляет лишь последствия гемоглобинурии. Повышение активности лактатдегидрогеназы служит важным маркером внутрисосудистого гемолиза и активности заболевания, но не подтверждает наличие ПНГ-клона. Поэтому окончательная верификация диагноза основана именно на обнаружении популяции клеток с дефицитом GPI-связанных белков методом проточной цитометрии.
| Исследование или признак | Что оценивается | Диагностическая роль при ПНГ |
|---|---|---|
| Многоцветная проточная цитометрия | Экспрессия GPI-связанных белков на гранулоцитах, моноцитах и эритроцитах | Подтверждает наличие и определяет размер ПНГ-клона; основной метод диагностики |
| FLAER-тест | Связывание флуоресцентного реагента с GPI-якорем | Высокочувствительно выявляет клетки с дефицитом GPI-якоря, особенно среди лейкоцитов |
| CD55 и CD59 | Экспрессия мембранных регуляторов системы комплемента | Снижение или отсутствие характерно для ПНГ-клеток и подтверждает их комплемент-чувствительность |
| Активность ЛДГ | Интенсивность внутрисосудистого гемолиза | Оценивает активность гемолиза, но является неспецифичным показателем и не заменяет проточную цитометрию |
| Общий анализ мочи и гемосидеринурия | Гемоглобинурия, эритроцитурия, признаки хронической потери железа | Поддерживает подозрение на внутрисосудистый гемолиз, но не устанавливает диагноз ПНГ |
| Цитологическое исследование периферической крови | Морфология клеток и количественные изменения форменных элементов | Может выявить анемию или цитопении, однако специфического морфологического критерия ПНГ не имеет |
| Размер ПНГ-клона | Доля клеток с дефицитом GPI-связанных белков | Имеет прогностическое и клиническое значение; оценивается с учётом гемолиза, тромбозов и сопутствующей костномозговой недостаточности |
ПНГ следует подозревать при необъяснимой внутрисосудистой гемолитической анемии, тромбозах в атипичных венозных бассейнах и сочетании гемолиза с апластической анемией или другими цитопениями. Отрицательный результат исследования только эритроцитов не исключает заболевание, особенно после гемотрансфузии или при выраженном гемолизе. Для повышения достоверности используют панели, включающие FLAER и несколько независимых GPI-связанных маркеров. Результаты проточной цитометрии интерпретируют совместно с клиническими проявлениями, показателями гемолиза и состоянием костномозгового кроветворения.