2) жидкой крови с гепарином
3) высушенных пятнах крови на карточке фильтре (+)
4) жидкой крови без антикоагулянта
Активность лизосомных ферментов часто определяют в высушенных пятнах цельной крови на фильтровальной карточке. Кровь наносят на специальную бумагу, высушивают при комнатной температуре и направляют в лабораторию, где из образца извлекают ферменты и исследуют их активность с использованием флуорогенных или хромогенных субстратов. Метод удобен для массового и селективного скрининга лизосомных болезней накопления, включая болезнь Помпе, болезнь Фабри, болезнь Гоше и мукополисахаридозы.
Диагностическое значение имеет снижение активности конкретного фермента по сравнению с референсными значениями, однако результат оценивают с учётом возраста, качества образца и возможной псевдодефицитной активности. Высушенная кровь содержит ферменты клеточных элементов, прежде всего лейкоцитов, а стабилизация на фильтровальной бумаге позволяет транспортировать образец без сложных условий хранения. Жидкая кровь с гепарином может применяться для отдельных лейкоцитарных исследований, но свернувшаяся кровь непригодна для стандартизированного анализа клеточной ферментативной активности; лимфа для этой цели рутинно не используется.
| Материал | Диагностические возможности | Основные особенности и ограничения |
|---|---|---|
| Высушенное пятно цельной крови | Первичный анализ активности ряда лизосомных ферментов, скрининг лизосомных болезней накопления | Минимальный объём, удобная транспортировка, стандартизированное хранение на фильтровальной карточке |
| Лейкоциты из жидкой крови с антикоагулянтом | Подтверждающее исследование активности фермента в клеточной фракции | Требует своевременной доставки, выделения лейкоцитов и соблюдения условий обработки |
| Плазма или сыворотка | Может использоваться для отдельных ферментов и биохимических маркеров | Результат зависит от клеточного состава, гемолиза и особенностей методики; не универсальный материал |
| Свернувшаяся кровь без антикоагулянта | Ограниченная пригодность для анализа внутриклеточной активности | После образования сгустка клеточные элементы удаляются или повреждаются, что снижает воспроизводимость |
| Лимфа | Не является стандартным материалом для определения активности лизосомных ферментов | Забор сложен, диагностическая информативность для данной задачи не превосходит валидированные образцы крови |
| Выраженное снижение активности фермента | Поддерживает диагноз соответствующей лизосомной болезни накопления | Требует подтверждения в лейкоцитах или культуре фибробластов и молекулярно-генетического исследования |
| Нормальная или пограничная активность | Не всегда исключает заболевание | Возможны псевдодефицит, непригодность пятна, остаточная активность или носительство; необходима клинико-лабораторная корреляция |
Высушенные пятна крови являются оптимальным материалом для первичного определения активности многих лизосомных ферментов благодаря доступности и устойчивости образца. При выявлении патологического результата проводят подтверждающую ферментную диагностику в лейкоцитах или фибробластах и анализ гена, связанного с заболеванием. Интерпретация должна учитывать клинические признаки, концентрацию субстрата или биомаркеров накопления и семейный анамнез. Качество нанесения и полного высушивания пятна существенно влияет на достоверность исследования.