2) FISH c хромосомо-специфичными ДНК-зондами на хромосомы группы G
3) анализа дифференциально G-окрашенных метафазных хромосом
4) анализа рутинно окрашенных метафазных хромосом
Многоцветная FISH (mFISH) на метафазных хромосомах позволяет одновременно визуализировать все хромосомы с использованием наборов флуоресцентно меченых ДНК-зондов. Каждая хромосома приобретает индивидуальный цветовой профиль, благодаря чему выявляются реципрокные и сложные транслокации, включая обмены между несколькими хромосомами. Такой подход особенно информативен при биологической дозиметрии после радиационного воздействия, когда необходимо установить факт и примерный уровень облучения по частоте стабильных аберраций.
Стабильные транслокации сохраняются в клеточных потомках и могут обнаруживаться спустя длительное время после облучения, в отличие от дицентрических хромосом и ацентрических фрагментов, которые чаще элиминируются при клеточных делениях. Исследование метафазных клеток обеспечивает анализ структурных перестроек на уровне отдельных хромосом и позволяет учитывать сложные радиационно-индуцированные аберрации. Поэтому именно mFISH является наиболее подходящим методом для чувствительного и объективного выявления стабильных хромосомных транслокаций.
Ограниченная FISH с зондами к отдельным хромосомам выявляет только перестройки с участием выбранных мишеней и может пропустить транслокации между другими хромосомами. Дифференциальное G-окрашивание и рутинная окраска зависят от качества метафаз и разрешающей способности метода, хуже распознают небольшие или сложные перестройки и менее пригодны для массовой количественной оценки радиационного поражения.
| Метод | Основной диагностический признак | Возможности при радиационном поражении | Ограничения |
|---|---|---|---|
| mFISH на метафазных хромосомах | Индивидуальная многоцветная маркировка хромосом и выявление обменов между ними | Обнаружение стабильных реципрокных и сложных транслокаций, пригодность для ретроспективной биологической дозиметрии | Высокая стоимость, необходимость специального оборудования и анализа метафаз |
| FISH с хромосомо-специфичными зондами | Флуоресцентная маркировка одной или нескольких выбранных хромосом | Целенаправленное выявление перестроек с участием определённых хромосом | Не позволяет полноценно оценить транслокации с участием немаркированных хромосом |
| G-окрашивание метафаз | Чередующийся рисунок тёмных и светлых полос хромосом | Морфологическая оценка крупных структурных перестроек и числовых аномалий | Низкая чувствительность к малым, сложным и криптическим транслокациям |
| Рутинная окраска метафаз | Общая морфология и число хромосом без специфической идентификации участков | Ориентировочная оценка грубых хромосомных нарушений | Недостаточная точность для установления партнёров транслокации |
| Дицентрический анализ | Выявление хромосом с двумя центромерами и ацентрических фрагментов | Чувствительный метод ранней биологической дозиметрии после острого облучения | Аберрации нестабильны и уменьшаются при пролиферации клеток, поэтому метод ограничен по времени |
| Стабильная транслокация | Сохранение обмена участками хромосом при последующих клеточных делениях | Позволяет оценивать отдалённые последствия и перенесённое облучение | Не всегда указывает точное время воздействия и может встречаться спонтанно с низкой частотой |
Результат mFISH оценивают по частоте клеток со стабильными транслокациями и другим окрашиваемым перестройкам. Для интерпретации учитывают возраст, фоновые спонтанные аберрации, вид излучения и предполагаемую дозу. Наиболее надёжная оценка проводится по достаточному числу метафаз с применением стандартизированных протоколов подсчёта. Метод также может использоваться для мониторинга отдалённых цитогенетических последствий радиационного воздействия.