2) лимфоциты (+)
3) базофилы
4) эозинофилы
Для стандартного цитогенетического исследования чаще всего используют лимфоциты периферической крови, преимущественно Т-лимфоциты. В норме зрелые лимфоциты находятся в фазе покоя клеточного цикла, поэтому перед исследованием их стимулируют фитогемагглютинином, после чего культивируют in vitro. На стадии метафазы деление останавливают колцемидом или колхицином, когда хромосомы максимально спирализованы и пригодны для подсчёта, оценки формы и выявления структурных перестроек.
После гипотонической обработки и фиксации хромосомы окрашивают, чаще всего методом G-бэндинга с использованием трипсина и окраски по Гимзе. Полученная метафазная пластинка позволяет определить число хромосом, половой кариотип, а также диагностировать анеуплоидии, делеции, дупликации, транслокации и другие видимые микроскопические изменения. Лимфоциты удобны тем, что доступны из венозной крови, могут быть сравнительно легко стимулированы к пролиферации и дают достаточное количество метафаз для анализа.
Клетки костного мозга применяют преимущественно при подозрении на клональные заболевания кроветворной системы, например острые лейкозы и миелодиспластические синдромы. Базофилы и эозинофилы не используются рутинно для кариотипирования: они представлены в периферической крови в небольшом количестве и не обеспечивают стандартного получения делящихся клеток. Таким образом, выбор лимфоцитов основан на сочетании доступности материала, возможности митогенной стимуляции и получения информативных метафаз.
| Источник клеток | Возможность получения метафаз | Основное применение | Особенности |
|---|---|---|---|
| Лимфоциты периферической крови | Высокая после стимуляции фитогемагглютинином | Рутинное исследование конституционального кариотипа | Минимально инвазивный забор, стандартный материал для G-бэндинга |
| Клетки костного мозга | Высокая благодаря наличию пролиферирующих предшественников | Цитогенетика при лейкозах, миелодисплазии и других гемобластозах | Инвазивный забор; результат отражает преимущественно кроветворный клон |
| Фибробласты кожи | Возможна после длительного культивирования | Исследование при мозаицизме или невозможности получить делящиеся лимфоциты | Требуют биопсии и более продолжительной подготовки культуры |
| Амниоциты или клетки хориона | Возможна после культивирования либо непосредственно в отдельных методиках | Пренатальная диагностика хромосомных нарушений | Материал получают инвазивными акушерскими процедурами |
| Базофилы | Низкая в стандартных условиях | Не используются для рутинного кариотипирования | Малочисленны и не обеспечивают стабильного выхода метафаз |
| Эозинофилы | Низкая в стандартных условиях | Не используются для рутинного кариотипирования | Зрелые гранулоциты не подходят для получения стандартного метафазного материала |
Классическое кариотипирование принципиально требует клеток с сохранёнными ядрами и способностью вступать в митоз. Важнейшим диагностическим этапом является анализ метафазных хромосом, а не просто подсчёт клеток крови. При подозрении на небольшие геномные перестройки дополнительно применяют FISH, хромосомный микроматричный анализ или секвенирование. Однако для первичной оценки числа и крупных структурных изменений хромосом стимулированные лимфоциты периферической крови остаются основным материалом.Учебный курс: тесты с ответами по генетике.