2) центромеро-специфичные ДНК-зонды
3) хромосомо-специфичные ДНК-библиотеки
4) спектральное кариотипирование хромосом
Для выявления терминальных микроделеций применяют субтеломерные ДНК-зонды, которые комплементарны уникальным последовательностям, расположенным непосредственно перед теломерой каждой хромосомы. При флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) отсутствие сигнала соответствующего зонда на одном из гомологов указывает на утрату терминального участка. Такой подход особенно важен при криптических делециях, которые не определяются при стандартном кариотипировании из-за небольшого размера и отсутствия выраженных морфологических изменений хромосом.
Терминальные микроделеции могут быть причиной задержки психомоторного и речевого развития, интеллектуальной недостаточности, врождённых пороков развития и дисморфических признаков. Субтеломерные исследования позволяют одновременно оценить концевые участки всех хромосом и выявить не только делеции, но и несбалансированные продукты транслокаций. Для подтверждения результата необходимо учитывать качество метафаз, наличие мозаицизма и при необходимости исследовать родителей, поскольку терминальная потеря материала может быть следствием сбалансированной перестройки у одного из них.
Центромерные зонды предназначены главным образом для определения числа или идентификации центромер, а хромосомо-специфичные ДНК-библиотеки и спектральное кариотипирование эффективнее при крупных перестройках и сложных хромосомных аномалиях. Они не являются оптимальными методами адресного поиска небольших концевых потерь. В современной практике субтеломерную FISH дополняют хромосомным микроматричным анализом или MLPA, особенно если требуется скрининг многочисленных локусов и точная оценка размера дисбаланса.
| Метод или тип зонда | Основная мишень | Диагностическая задача | Возможности при терминальных микроделециях |
|---|---|---|---|
| Субтеломерные ДНК-зонды | Уникальные последовательности вблизи теломер | Поиск концевых делеций и несбалансированных терминальных перестроек | Оптимальный адресный метод; отсутствие сигнала на одном гомологе указывает на потерю участка |
| Центромеро-специфичные зонды | Альфа-сателлитная ДНК центромер | Определение числа отдельных хромосом, выявление анеуплоидий | Не оценивают концевые плечи и обычно не выявляют терминальную делецию |
| Хромосомо-специфичные ДНК-библиотеки | Набор повторяющихся последовательностей всей хромосомы | Окрашивание хромосом и анализ крупных структурных перестроек | Могут обнаруживать крупные транслокации, но недостаточно специфичны и чувствительны для малых концевых потерь |
| Спектральное кариотипирование | Различные хромосомы, окрашенные разными спектральными метками | Идентификация происхождения хромосомного материала при сложных перестройках | Ограничено разрешением метода; небольшие микроделеции часто остаются нераспознанными |
| Стандартное кариотипирование | Морфология и количество хромосом в метафазе | Выявление крупных численных и структурных аномалий | Низкая чувствительность к субмикроскопическим терминальным делециям |
| Хромосомный микроматричный анализ | Геномные копийные изменения по множеству локусов | Геномный поиск делеций и дупликаций, оценка их размера | Высокая чувствительность, но не всегда позволяет определить сбалансированную перестройку или точную структуру события |
Субтеломерная FISH является целевым тестом при подозрении на концевую делецию, особенно у пациента с сочетанием задержки развития и множественных врождённых аномалий при нормальном кариотипе. Интерпретация должна учитывать контрольные сигналы на интактной хромосоме и возможный мозаицизм. При обнаружении делеции целесообразно уточнить её протяжённость методом микроматричного анализа и провести обследование родителей. Это важно для оценки риска повторения патологии в семье и медико-генетического консультирования.