2) флюориметрические методы
3) дифференциальное окрашивание в полиакриламидном геле
4) электрофорез гликозаминогликанов (+)
Гликозаминогликаны (ГАГ) представляют собой кислые полисахариды, содержащие сульфатированные и карбоксилированные группы, поэтому в электрическом поле они перемещаются к аноду. Электрофоретическое разделение основано на различиях электрофоретической подвижности фракций, зависящей от степени сульфатирования, молекулярной массы и пространственной конфигурации. В диагностике мукополисахаридозов обычно исследуют мочу: определяют не только общее содержание ГАГ, но и соотношение отдельных фракций.
Характер электрофореграммы позволяет выявить преимущественное накопление гепарансульфата, дерматансульфата, кератансульфата или хондроитинсульфата. Например, сочетанное увеличение дерматансульфата и гепарансульфата типично для мукополисахаридозов I и II типов, преимущественное накопление гепарансульфата — для III типа, а дерматансульфата — для VI типа. Таким образом, метод дает представление о спектре субстратов, накапливающихся вследствие дефекта лизосомной гидролазы, и помогает проводить предварительную дифференциальную диагностику.
Флюориметрические методы преимущественно применяют для определения активности конкретных лизосомных ферментов, а не для разделения всего спектра ГАГ. Бумажная хроматография используется главным образом для анализа низкомолекулярных углеводов и олигосахаридов; окрашивание фракций в полиакриламидном геле может иметь вспомогательное значение, но не является стандартным способом оценки профиля ГАГ. Поэтому именно электрофорез наиболее непосредственно характеризует качественный состав выделенных гликозаминогликанов.
| Выявляемая фракция или профиль | Наиболее характерные заболевания | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Преимущественно гепарансульфат | Мукополисахаридоз III типа; возможен также при I, II и VII типах | Поддерживает наличие дефекта деградации гепарансульфата, особенно при выраженном поражении центральной нервной системы |
| Преимущественно дерматансульфат | Мукополисахаридоз VI типа | Характерный профиль при дефиците арилсульфатазы B; помогает отличать его от форм с преобладанием гепарансульфата |
| Сочетанное увеличение дерматансульфата и гепарансульфата | Мукополисахаридозы I и II типов, иногда VII типа | Указывает на широкий спектр накопления; сам по себе профиль не позволяет надежно различить I и II типы |
| Кератансульфат | Мукополисахаридозы IVA и IVB | Сочетание с выраженной скелетной дисплазией поддерживает диагноз синдрома Моркио; требуется ферментативное подтверждение |
| Хондроитин-6-сульфат или смешанный хондроитиновый профиль | Особенно мукополисахаридоз IVA; смешанные варианты возможны при VII типе | Имеет вспомогательное значение и интерпретируется вместе с данными о кератансульфате и клинической картиной |
| Нормальный или малоизмененный профиль | Отсутствие мукополисахаридоза либо мягкая форма, ранний возраст, проводимая терапия | Не исключает заболевание полностью; важны возраст пациента, функция почек и чувствительность метода |
| Повышенное общее содержание ГАГ без четкого спектра | Мукополисахаридоз, вторичные изменения или преаналитические особенности образца | Требует определения активности соответствующих ферментов и молекулярно-генетического исследования |
Электрофорез ГАГ является методом первичной биохимической характеристики, а не окончательной типизации мукополисахаридоза. Подтверждение проводят путем измерения активности лизосомных ферментов в лейкоцитах, фибробластах или других валидированных образцах и выявления патогенного варианта в соответствующем гене. При сомнительных результатах применяют количественный анализ отдельных дисахаридов методом тандемной масс-спектрометрии. Интерпретация должна учитывать клинический фенотип, возраст, функцию почек и возможность ферментозаместительной терапии.