2) NGS экзома (+)
3) биохимические методы диагностики
4) молекулярное кариотипирование
Немалиновая миопатия представляет собой генетически гетерогенную группу врождённых и ранних форм миопатий, обусловленных вариантами в различных генах, включая ACTA1, NEB, KLHL40, KLHL41, TNNT1 и другие. Заболевание обычно проявляется мышечной гипотонией, преимущественно проксимальной слабостью, снижением или отсутствием сухожильных рефлексов, нарушением двигательного развития и, при тяжёлых формах, дыхательной недостаточностью. Морфологическим признаком является наличие немалиновых телец (палочек) в мышечных волокнах, однако окончательное подтверждение этиологии требует выявления патогенного или вероятно патогенного варианта в соответствующем гене.
Наиболее рациональным методом первичной подтверждающей генетической диагностики является NGS-секвенирование экзома. Метод одновременно исследует кодирующие последовательности большого числа генов и позволяет выявлять однонуклеотидные варианты, небольшие делеции и инсерции, включая изменения в генах, которые клинически невозможно надёжно различить. При необходимости анализ выполняют в формате трио с исследованием образцов ребёнка и родителей, что повышает точность интерпретации вариантов и позволяет установить de novo-возникновение или тип наследования.
Секвенирование по Сенгеру целесообразно преимущественно для подтверждения уже известного семейного варианта или в отдельных случаях при выраженном клиническом подозрении на конкретный ген. Биохимические исследования могут выявлять неспецифическое повышение креатинкиназы и не устанавливают молекулярную причину заболевания. Молекулярное кариотипирование предназначено главным образом для обнаружения крупных делеций, дупликаций и дисбалансов числа копий, но не выявляет большинство точечных вариантов, характерных для немалиновой миопатии.
| Метод | Основные выявляемые изменения | Роль при немалиновой миопатии |
|---|---|---|
| NGS экзома | Варианты в кодирующих областях множества генов, однонуклеотидные замены, небольшие инсерции и делеции | Предпочтительный метод при генетической гетерогенности и отсутствии установленного семейного варианта |
| NGS-панель миопатий | Исследование заранее определённого набора генов, включая оценку отдельных вариантов числа копий | Альтернативный таргетный подход; особенно полезен при типичном фенотипе и доступной валидированной панели |
| Секвенирование по Сенгеру | Точечные варианты и небольшие инделы в одном выбранном участке или гене | Подтверждение известного варианта, каскадное обследование родственников или верификация результата NGS |
| Молекулярное кариотипирование | Крупные делеции, дупликации и другие изменения числа копий хромосомного материала | Дополнительный метод при подозрении на CNV; недостаточно для большинства патогенных вариантов при данном заболевании |
| Биохимические исследования | Креатинкиназа, трансаминазы и другие неспецифические лабораторные показатели | Помогают оценить мышечное повреждение, но не подтверждают молекулярный диагноз |
| Биопсия мышцы | Немалиновые тельца, изменения размера волокон и другие морфологические признаки | Поддерживает клинико-морфологический диагноз, но не заменяет генетическое исследование и может быть нормальной при некоторых формах |
Отрицательный результат экзомного исследования не исключает немалиновую миопатию: возможны глубокие интронные варианты, структурные перестройки, сложные варианты числа копий или изменения в плохо покрываемых участках. В таких ситуациях показаны анализ CNV, расширенная геномная диагностика или повторная интерпретация данных с учётом обновления генетических баз. Результат должен оцениваться совместно с клиническими, лабораторными и морфологическими признаками согласно критериям классификации вариантов ACMG/AMP.