2) сухую
3) с ЭДТА
4) с гепарином (+)
Для цитогенетического исследования костного мозга используют пробирку с гепарином, чаще с натриевой солью. Гепарин предотвращает свертывание крови, не связывая кальций в такой степени, которая нарушала бы жизнеспособность клеток. Это особенно важно для получения метафазных пластинок: клетки костного мозга должны сохранять способность к делению в краткосрочной культуре, после чего их фиксируют и исследуют кариотип, структурные перестройки хромосом и числовые аномалии.
ЭДТА и цитрат связывают ионы кальция, необходимые для нормального клеточного метаболизма и ряда ферментативных процессов. В результате может снижаться жизнеспособность клеток и выход делящихся клеток в культуре, что приводит к недостаточному количеству метафаз или ухудшению качества хромосомных препаратов. Сухая пробирка непригодна, поскольку кровь свертывается, клетки агрегируют и становятся недоступными для полноценного культивирования; кроме того, сгусток затрудняет равномерное приготовление клеточной суспензии.
Цитогенетическая диагностика миелоидных неоплазий, острых лейкозов и ряда лимфопролиферативных заболеваний основана на анализе хромосом в делящихся клетках. Поэтому ключевым требованием к материалу является сочетание предотвращения коагуляции и сохранения клеточной пролиферативной активности. Гепаринизированный костномозговой аспират обычно доставляют в лабораторию как можно быстрее, поскольку длительное хранение снижает количество жизнеспособных клеток и вероятность получения информативного кариотипа.
| Вид материала или добавки | Механизм действия | Влияние на цитогенетическое исследование костного мозга | Основное применение |
|---|---|---|---|
| Натриевый гепарин | Подавляет каскад коагуляции преимущественно через активацию антитромбина, не вызывая выраженного связывания кальция | Сохраняет жизнеспособность и митотическую активность клеток, обеспечивает получение метафазных пластинок | Стандартный антикоагулянт для классического кариотипирования костного мозга |
| ЭДТА | Хелатирует ионы кальция, формируя с ними стабильные комплексы | Может снижать жизнеспособность и пролиферативный потенциал клеток, ухудшая выход метафаз | Гематологические и молекулярные исследования, подсчет клеток; обычно не является оптимальным для культуральной цитогенетики |
| Цитрат | Обратимо связывает кальций и препятствует образованию фибрина | Разведение образца и изменение ионного состава могут снижать качество клеточной культуры и цитогенетического препарата | Исследования системы гемостаза |
| Сухая пробирка | Антикоагулянт отсутствует, поэтому формируется сгусток | Клетки фиксируются в сгустке, затрудняются выделение и равномерное культивирование материала | Получение сыворотки, но не стандартное цитогенетическое исследование костного мозга |
| Клеточная культура костного мозга | Создает условия для спонтанного или стимулированного деления клеток in vitro | Позволяет остановить клетки на стадии метафазы и оценить число и структуру хромосом | Кариотипирование, выявление анеуплоидий и хромосомных перестроек |
| Своевременная доставка образца | Ограничивает снижение жизнеспособности клеток и спонтанную деградацию материала | Повышает вероятность получения достаточного числа качественных метафаз | Обязательное преаналитическое условие цитогенетического исследования |
Гепарин является оптимальным антикоагулянтом именно потому, что сочетает предотвращение свертывания с сохранением клеточной активности. Выбор пробирки напрямую влияет на количество анализируемых метафаз и достоверность кариотипирования. При подозрении на клональные хромосомные нарушения желательно дополнительно учитывать требования лаборатории к объему образца, срокам доставки и температурному режиму. Для молекулярно-генетических методов могут применяться другие типы пробирок, но они не заменяют гепаринизированный материал при стандартном культуральном цитогенетическом исследовании.