2) молекулярно-генетических
3) молекулярно-цитогенетических (+)
4) цитогенетических
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) относится к молекулярно-цитогенетическим методам, поскольку объединяет цитогенетический анализ клеток или хромосом с использованием молекулярных ДНК-зондов. Зонд содержит флуоресцентную метку и специфически связывается с комплементарной последовательностью нуклеотидов в исследуемом участке генома. Образовавшиеся сигналы визуализируют с помощью флуоресцентного микроскопа.
Цитогенетическая составляющая метода заключается в сохранении пространственного расположения генетического материала непосредственно в интерфазном ядре или на метафазных хромосомах. Молекулярная составляющая определяется высокой последовательностной специфичностью зонда, благодаря чему выявляются микроделеции, амплификации, транслокации, инверсии и анеуплоидии, которые могут быть недоступны обычному микроскопическому исследованию кариотипа. В отличие от классического кариотипирования, FISH не требует обязательного анализа всех хромосом и может выполняться на некультивируемых клетках.
Метод особенно полезен при направленной диагностике конкретной хромосомной или генной аномалии: например, при выявлении транслокации t(9;22) с образованием BCR::ABL1, амплификации HER2, микроделеции 22q11.2 или быстрой пренатальной оценки наиболее частых анеуплоидий. Ограничением является необходимость заранее предполагать исследуемую область, поэтому отрицательный результат FISH не исключает других геномных нарушений.
| Подход | Основной объект и принцип | Какие изменения выявляет | Ключевая особенность |
|---|---|---|---|
| Классическое кариотипирование | Метафазные хромосомы, анализ их числа и морфологии после дифференциального окрашивания | Крупные числовые и структурные перестройки | Обзор всего хромосомного набора, но ограниченное разрешение |
| FISH | Гибридизация флуоресцентно меченого ДНК-зонда с комплементарной последовательностью in situ | Микроделеции, амплификации, специфические транслокации, инверсии и анеуплоидии | Высокая специфичность и возможность исследования интерфазных ядер |
| Хромосомный микроматричный анализ | Гибридизация геномной ДНК с множеством зондов на микрочипе | Изменения числа копий по всему геному | Широкий охват, но обычно не выявляет сбалансированные перестройки |
| ПЦР | Амплификация выбранного фрагмента ДНК с последующим анализом продукта | Точечные варианты, небольшие вставки и делеции, отдельные транскрипты | Молекулярно-генетический метод без визуализации хромосомного расположения |
| Секвенирование нового поколения | Массовое параллельное определение последовательности ДНК | Варианты нуклеотидной последовательности в одном или множестве генов | Высокая информативность, но интерпретация зависит от покрытия и биоинформатического анализа |
| Интерфазная FISH | Подсчет флуоресцентных сигналов в ядрах без получения метафазных пластинок | Анеуплоидии и наличие конкретной делеции или амплификации | Быстрый результат, однако невозможно полноценно оценить морфологию всех хромосом |
| Метафазная FISH | Гибридизация зондов на хромосомах в метафазе | Локализация перестройки и уточнение вовлеченных хромосомных участков | Сочетает адресность молекулярного зонда с цитогенетической визуализацией |
Таким образом, основанием для отнесения FISH к молекулярно-цитогенетическим методам служит сочетание специфической ДНК-гибридизации и анализа генетического материала непосредственно в клетке. Результат оценивают по числу, расположению и характеру флуоресцентных сигналов. Для комплексной диагностики FISH может дополнять кариотипирование, микроматричный анализ или секвенирование.