2) диагностировать хромосомные микродупликации
3) проводить диагностику микроделеционных синдромов
4) оценивать уровень хромосомного мозаицизма в интерфазных ядрах
Многоцветное окрашивание хромосом (M-FISH, или спектральное кариотипирование SKY) основано на гибридизации набора ДНК-зондов, каждый из которых имеет индивидуальную комбинацию флуорофоров. В результате каждая хромосома приобретает специфический цвет, что позволяет установить происхождение фрагментов и выявить обмен участками между хромосомами. Поэтому метод эффективен для обнаружения робертсоновских транслокаций между негомологичными акроцентрическими хромосомами 13, 14, 15, 21 и 22.
При робертсоновской транслокации происходит слияние длинных плеч двух акроцентрических хромосом с формированием одной производной хромосомы; короткие плечи обычно утрачиваются, а число хромосом в кариотипе составляет 45. Поскольку вовлечённые хромосомы окрашиваются разными цветами, M-FISH позволяет непосредственно определить их участие в структурной перестройке, включая сложные или криптические варианты, недостаточно очевидные при стандартном кариотипировании. Метод преимущественно анализирует метафазные хромосомы и имеет ограниченное разрешение, поэтому не является оптимальным для выявления микроделеций, микродупликаций и количественной оценки мозаицизма в интерфазных ядрах.
| Метод | Основная диагностическая задача | Возможности при структурных перестройках | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Стандартное кариотипирование | Оценка числа и крупной структуры хромосом | Выявляет большинство крупных транслокаций, включая типичные робертсоновские | Ниже разрешение; сложные перестройки и происхождение небольших фрагментов могут оставаться неясными |
| M-FISH/SKY | Идентификация происхождения хромосомного материала | Определяет обмен участками между негомологичными хромосомами, в том числе робертсоновские и сложные транслокации | Требует метафазных клеток; не предназначено для точного выявления субмикроскопических изменений |
| Локус-специфическая FISH | Проверка конкретного локуса или синдрома | Подтверждает заданную микроделецию, микродупликацию или транслокацию с известными точками разрыва | Не позволяет проводить широкий поиск перестроек без заранее выбранных зондов |
| Хромосомный микроматричный анализ | Выявление дисбаланса генетического материала | Высокая чувствительность к микроделециям и микродупликациям | Не обнаруживает сбалансированные транслокации и инверсии без изменения дозы |
| FISH в интерфазных ядрах | Быстрый анализ числа копий или конкретных сигналов | Может выявлять анеуплоидию и оценивать мозаицизм при использовании специфических центромерных или локусных зондов | Многоцветное окрашивание целых хромосом не заменяет специализированную интерфазную FISH-диагностику |
| Молекулярное секвенирование | Уточнение нуклеотидной последовательности и точек разрыва | Позволяет характеризовать малые варианты и некоторые сложные перестройки на молекулярном уровне | Не всегда выявляет крупные сбалансированные перестройки без специально выбранного метода анализа |
Клиническое значение робертсоновской транслокации определяется её сбалансированностью и риском образования несбалансированных гамет. Носитель сбалансированного варианта часто фенотипически здоров, однако может иметь бесплодие, невынашивание беременности или риск рождения ребёнка с трисомией, особенно при перестройках с участием хромосомы 21. Для окончательной интерпретации M-FISH сопоставляют с данными стандартного кариотипирования, FISH или микроматричного анализа. При выявлении перестройки необходимы консультация врача-генетика и, при соответствующих показаниях, исследование родителей.