2) анеуплоидий половых хромосом в интерфазных ядрах
3) хромосомных транслокаций в метафазных клетках (+)
4) анеуплоидий по аутосомам в интерфазных ядрах
Многоцветная FISH (M-FISH, включая спектральное кариотипирование SKY) основана на одновременной гибридизации наборов ДНК-зондов, специфичных для разных хромосом. Каждая хромосома получает уникальную комбинацию флуорохромов и визуально определяется как отдельный цвет. При транслокации участок одной хромосомы оказывается на другой, поэтому в метафазной пластинке выявляется производная хромосома с сочетанием цветов, соответствующих двум или нескольким хромосомам.
Метод особенно информативен для выявления сложных и криптических реципрокных транслокаций, а также для уточнения происхождения маркерных и производных хромосом. Анализ метафазных клеток позволяет оценить не только число флуоресцентных сигналов, но и их расположение относительно морфологии хромосом. Анеуплоидии в интерфазных ядрах обычно диагностируют с помощью центромерных или локус-специфичных зондов, тогда как перицентрические инверсии требуют методов, позволяющих оценить порядок участков одной хромосомы, поскольку при многоцветной окраске вся хромосома сохраняет тот же цвет.
| Метод | Основной объект исследования | Диагностический критерий | Типичные возможности и ограничения |
|---|---|---|---|
| Многоцветная FISH (M-FISH/SKY) | Метафазные хромосомы | Сочетание цветов на одной хромосоме, наличие фрагмента другого цветового происхождения | Выявляет реципрокные и сложные транслокации, производные и маркерные хромосомы |
| Центромерная FISH в интерфазных ядрах | Интерфазные клетки | Изменение числа центромерных сигналов | Быстрый скрининг анеуплоидий половых хромосом и отдельных аутосом |
| Локус-специфичная двухцветная FISH | Метафазные или интерфазные клетки | Разделение, слияние или атипичное расположение сигналов в заданном локусе | Подтверждение конкретной транслокации или перестройки, например при онкогематологических заболеваниях |
| Break-apart FISH | Интерфазные и метафазные ядра | Разведение двух зондов, расположенных по разные стороны точки разрыва | Обнаруживает перестройку конкретного гена; не определяет партнёрскую хромосому без дополнительных зондов |
| G-бэндинг кариотипа | Метафазные хромосомы | Изменение структуры и полосатого рисунка хромосомы | Позволяет оценивать крупные транслокации и инверсии, но имеет меньшую разрешающую способность и субъективность интерпретации |
| Хромосомный микроматричный анализ | ДНК из клеток без обязательного получения метафаз | Изменение числа копий геномных участков | Высокочувствителен к делециям и дупликациям, но обычно не выявляет сбалансированные транслокации и инверсии |
Таким образом, ключевым признаком транслокации при M-FISH является появление на метафазной хромосоме участков с разными цветовыми метками. Сбалансированная транслокация может не сопровождаться потерей или приобретением генетического материала, поэтому хромосомный микроматричный анализ в такой ситуации способен оставаться нормальным. Результат M-FISH при необходимости подтверждают стандартным кариотипированием, таргетной FISH или молекулярным исследованием точек разрыва, что важно для прогноза, репродуктивного консультирования и оценки риска наследования перестройки.