2) детекция хромосомных микроделеций
3) диагностика парацентрических инверсий
4) анализ комплексных хромосомных перестроек (+)
mFISH (multicolor fluorescence in situ hybridization) — метод многоцветной флуоресцентной гибридизации, при котором все хромосомы окрашиваются уникальными комбинациями флуорохромов. Это позволяет определить происхождение участков хромосомного материала и установить, какие хромосомы вовлечены в перестройку. Наиболее значимая область применения mFISH — анализ комплексных хромосомных перестроек, особенно при участии трёх и более хромосом, наличии маркерных хромосом, сложных транслокаций, инсерций и производных хромосом.
При комплексной перестройке стандартное кариотипирование может не позволить однозначно определить границы и происхождение материала, поскольку участки разных хромосом имеют сходные морфологические характеристики. mFISH выявляет их по цветовой метке и тем самым уточняет структуру перестройки, что важно для оценки её сбалансированности, прогноза репродуктивных рисков и интерпретации генетического заболевания или опухолевого клона. Для небольших микроделеций метод недостаточно разрешающ, а диагностика инверсий требует специальных локус-специфичных FISH-зондов, молекулярно-цитогенетических или молекулярно-генетических методов.
| Исследуемая задача | Предпочтительный метод | Диагностическая особенность |
|---|---|---|
| Комплексная перестройка с участием нескольких хромосом | mFISH | Одновременная идентификация происхождения хромосомных сегментов по уникальным комбинациям цветов |
| Сложная или криптическая транслокация | mFISH, при необходимости — FISH с локус-специфичными зондами | Позволяет установить вовлечённые хромосомы; точные точки разрывов требуют дополнительного анализа |
| Маркерная хромосома неясного происхождения | mFISH | Определяет, из какой хромосомы сформирован дополнительный структурный материал |
| Хромосомная микроделеция | Матричный хромосомный микроматричный анализ, MLPA или локус-специфичная FISH | Методы обладают большей пригодностью для выявления малых потерь генетического материала |
| Перицентрическая инверсия | Кариотипирование, FISH с зондами на область разрыва, PCR/NGS | Инверсия затрагивает центромеру; mFISH обычно не определяет её точные границы |
| Парацентрическая инверсия | Кариотипирование, breakpoint-FISH, PCR/NGS | Перестройка ограничена одним плечом хромосомы и требует выявления специфических точек разрыва |
mFISH следует рассматривать прежде всего как инструмент уточнения состава и происхождения хромосом при сложных структурных аномалиях. Метод хорошо дополняет стандартное кариотипирование, но не заменяет анализы с более высоким разрешением при микроделециях и исследовании точек разрыва. Окончательная интерпретация результата должна учитывать клинические данные, результаты микроматричного анализа и, при необходимости, молекулярное подтверждение перестройки.