2) волосяные луковицы
3) слюна и клетки буккального эпителия
4) лимфоциты периферической крови (+)
В рутинной медицинской генетике основным материалом для выделения геномной ДНК служит лейкоцитарная фракция периферической крови, прежде всего лимфоциты. В отличие от эритроцитов, зрелые формы которых лишены ядра, лимфоциты содержат полноценный геном и обеспечивают получение достаточного количества высокомолекулярной ДНК. Венозная кровь, взятая в пробирку с ЭДТА, удобна для транспортировки и последующего анализа методом ПЦР, секвенирования, MLPA, микроматричного исследования и других молекулярно-генетических методов.
Преимущество лимфоцитов периферической крови определяется их доступностью, относительно стабильным содержанием ДНК и возможностью стандартизованного выделения материала. При необходимости клеточной культуры лимфоциты можно стимулировать к делению, что особенно важно для цитогенетического исследования хромосом; для большинства методов анализа последовательности ДНК жизнеспособность клеток, однако, не является обязательной. Получаемый генетический материал обычно отражает конституциональный геном пациента и пригоден для диагностики наследственных заболеваний и оценки носительства патогенных вариантов.
Слюна, буккальный эпителий, волосяные луковицы и тканевые биоптаты также могут использоваться как источники ДНК, но чаще рассматриваются как альтернативные материалы. Их диагностическая ценность зависит от количества ядерных клеток, степени микробной или тканевой контаминации, качества хранения и предполагаемой мозаичности патологического процесса. Поэтому именно лимфоциты периферической крови являются классическим и наиболее универсальным субстратом для молекулярно-генетического исследования.
| Биологический материал | Источник ядерной ДНК | Основное применение | Диагностические ограничения |
|---|---|---|---|
| Лимфоциты периферической крови | Ядра циркулирующих лимфоцитов; также ДНК других лейкоцитов | ПЦР, секвенирование, MLPA, анализ CNV, цитогенетика после культивирования | Требуется корректный забор и хранение; при гематологических неоплазиях возможна соматическая примесь |
| Слюна и клетки буккального эпителия | Сл epительные клетки слизистой оболочки и лейкоциты слюны | Неинвазивное тестирование наследственных вариантов, массовый скрининг | Низкий выход ДНК, бактериальная контаминация, зависимость результата от качества полоскания и сбора |
| Волосяные луковицы | Ядерные клетки фолликула | Индивидуальная идентификация и отдельные генетические исследования при невозможности забора крови | Стриженный или выпавший волос без луковицы содержит мало ядерной ДНК; часто недостаточный выход материала |
| Тканевой биоптат | Ядерные клетки исследуемой ткани | Поиск тканеспецифических соматических вариантов, анализ опухоли, исследование мозаицизма | Инвазивность, неоднородность образца, необходимость учитывать нормальные и патологические клеточные популяции |
| Сухое пятно крови | Лейкоциты, сохранившиеся на фильтровальной бумаге | Неонатальный скрининг, дистанционный сбор и транспортировка образцов | Количество и фрагментация ДНК могут ограничивать сложные или повторные исследования |
| Амниотическая жидкость или ворсины хориона | Клетки плода и плацентарной ткани | Пренатальная диагностика хромосомных и моногенных заболеваний | Инвазивный способ получения; возможны материнская контаминация и плацентарный мозаицизм |
Таким образом, выбор лимфоцитов периферической крови основан на сочетании высокой доступности, достаточного содержания ядерной ДНК и стандартизованности лабораторной обработки. Для получения чистого геномного материала предпочтительна кровь с ЭДТА, поскольку этот антикоагулянт обычно не препятствует последующей амплификации ДНК. При отсутствии крови или необходимости исследовать тканеспецифические изменения применяются альтернативные образцы. Интерпретация результата всегда должна учитывать происхождение материала и вероятность мозаицизма или контаминации.