2) анализ всей последовательности гена АТР7В
3) поиск частых мутаций гена АТР7В (+)
4) анализ 1-2 экзонов гена АТР7А
Правильным первым этапом молекулярно-генетической диагностики является поиск частых патогенных вариантов гена ATP7B. Болезнь Вильсона — Коновалова наследуется аутосомно-рецессивно и обусловлена биаллельными патогенными вариантами именно этого гена. Кодируемая им медь-транспортирующая АТФаза экспрессируется преимущественно в гепатоцитах, обеспечивает включение меди в церулоплазмин и выведение её избытка с желчью; нарушение функции белка приводит к накоплению меди в печени, головном мозге, роговице и других органах.
Таргетированный поиск наиболее распространённых вариантов целесообразен как начальный молекулярный этап в популяциях, для которых известны частые или основательские мутации: такой анализ быстрее и экономичнее полного секвенирования. При отрицательном результате он не исключает заболевание, поскольку спектр вариантов ATP7B отличается выраженной генетической гетерогенностью; следующим этапом проводят анализ кодирующей последовательности и областей сплайсинга, а при необходимости — поиск экзонных делеций и дупликаций. Секвенирование ATP7B выявляет большинство патогенных вариантов, тогда как крупные внутригенные перестройки встречаются редко.
Ген ATP7A не связан с болезнью Вильсона — Коновалова: его патогенные варианты вызывают Х-сцепленные нарушения транспорта меди, прежде всего болезнь Менкеса. Поэтому исследование частых вариантов или отдельных экзонов ATP7A не соответствует этиологии рассматриваемого заболевания. Обнаружение двух патогенных вариантов ATP7B подтверждает молекулярный диагноз и имеет значение для обследования родственников, однако результаты генетического анализа оценивают совместно с показателями обмена меди и клиническими признаками.
| Диагностический подход | Назначение | Интерпретация и ограничения |
|---|---|---|
| Поиск частых вариантов ATP7B | Начальный таргетированный анализ при известном популяционном спектре мутаций | Положительный результат информативен; отрицательный не исключает заболевание |
| Секвенирование ATP7B | Выявление редких миссенс-, нонсенс-, небольших инсерционно-делеционных и сплайсинговых вариантов | Проводится при отсутствии частых вариантов или сразу как основной тест в современных лабораториях |
| Анализ делеций и дупликаций ATP7B | Поиск крупных экзонных перестроек, например методом MLPA | Дополнительный этап при выявлении только одного патогенного аллеля |
| Сывороточный церулоплазмин | Оценка нарушения включения меди в церулоплазмин | Снижение поддерживает диагноз, но показатель не обладает абсолютной специфичностью |
| Суточная экскреция меди с мочой | Выявление повышенного выделения не связанной с церулоплазмином меди | Используется в составе комплексного диагностического алгоритма |
| Кольца Кайзера — Флейшера | Обнаружение отложения меди в десцеметовой мембране роговицы | Особенно характерны для неврологической формы, но могут отсутствовать при изолированном поражении печени |
| Исследование ATP7A | Диагностика болезни Менкеса и других Х-сцепленных нарушений транспорта меди | Не подтверждает болезнь Вильсона — Коновалова |
Молекулярно-генетическое исследование дополняет, а не заменяет клинико-биохимическую диагностику. В Лейпцигской системе выявление одного или двух патогенных вариантов ATP7B повышает диагностическую оценку, но вариант неопределённого клинического значения сам по себе не подтверждает заболевание. После установления генотипа возможно прицельное обследование братьев, сестёр и других родственников пациента. Ранняя диагностика особенно важна, поскольку своевременная терапия препаратами, уменьшающими токсический пул меди, предотвращает необратимое поражение печени и нервной системы.