2) ДНК-диагностика (+)
3) электронейромиография
4) биохимический анализ
Подтверждение мышечной дистрофии Дюшенна основано на выявлении патогенного варианта в гене DMD, расположенном на участке Xp21.2 и кодирующем дистрофин — белок, обеспечивающий механическую устойчивость сарколеммы мышечного волокна. Заболевание наследуется преимущественно Х-сцепленно-рецессивно и у мальчиков обусловлено гемизиготным дефектом гена. Молекулярно-генетическое исследование позволяет установить конкретный тип мутации: делецию или дупликацию экзонов, небольшую вставку или делецию, а также однонуклеотидный вариант.
Для поиска крупных перестроек обычно применяют MLPA или методы сравнительной геномной гибридизации, а при отрицательном результате проводят секвенирование гена DMD методом NGS с подтверждением выявленного варианта методом Сэнгера. Обнаружение патогенной или вероятно патогенной мутации с учетом клинических данных подтверждает диагноз и позволяет выполнить генетическое консультирование семьи, определить носительство у родственниц и провести пренатальную или преимплантационную диагностику. При отсутствии выявленного варианта диагноз может быть дополнительно подтвержден исследованием дистрофина в биоптате мышцы иммуногистохимическим или иммуноблот-методом.
Креатинкиназа обычно значительно повышена уже на ранних стадиях, однако этот показатель отражает повреждение мышечных волокон и не является специфичным для дистрофии Дюшенна. Электронейромиография выявляет первично-мышечный тип поражения, но не определяет его молекулярную причину, а стандартное кариотипирование не предназначено для обнаружения большинства внутригенных изменений в DMD.
| Метод | Основной результат | Диагностическое значение при дистрофии Дюшенна |
|---|---|---|
| Молекулярно-генетическое исследование гена DMD | Выявление патогенного варианта | Подтверждает диагноз и уточняет молекулярный дефект |
| MLPA или сравнительная геномная гибридизация | Делеции и дупликации экзонов | Первичная методика поиска крупных копийных перестроек; выявляет большинство таких вариантов |
| NGS-секвенирование и подтверждение методом Сэнгера | Точечные варианты, небольшие инсерции и делеции | Используется при отсутствии крупных перестроек или в составе расширенной панели |
| Биохимическое исследование | Резкое повышение активности креатинкиназы | Важный скрининговый признак мышечного повреждения, но не специфичен и не заменяет генетическое подтверждение |
| Электронейромиография | Миопатический паттерн: низкоамплитудные короткие потенциалы двигательных единиц | Подтверждает мышечный, а не нейрогенный характер слабости, но этиологию не устанавливает |
| Кариотипирование | Оценка числа и крупных структурных изменений хромосом | Как правило, не выявляет внутригенные мутации DMD и не используется для подтверждения заболевания |
| Иммуногистохимия или иммуноблот дистрофина | Отсутствие или резкое снижение белка в мышечной ткани | Резервный подтверждающий метод при неинформативном генетическом исследовании |
Генетическое подтверждение важно не только для установления диагноза, но и для прогноза течения заболевания и выбора таргетных подходов у пациентов с определенными вариантами мутаций. Молекулярный результат следует интерпретировать по критериям патогенности и сопоставлять с клиническим фенотипом. Выявление мутации также имеет значение для обследования матерей и других родственниц пациента на носительство.