2) метод, основанный на принципе агглютинации
3) метод, основанный на поиске комплекса антиген-антитело
4) высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики (+)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод молекулярно-генетической диагностики, основанный на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты. Для этого используют матричную ДНК или РНК, праймеры, термостабильную ДНК-полимеразу, нуклеотиды и буферную систему. Цикл реакции включает денатурацию двойной спирали, присоединение праймеров к комплементарным участкам и ферментативное удлинение цепи; повторение циклов приводит к экспоненциальному накоплению целевого фрагмента.
ПЦР применяют для выявления инфекционных агентов, идентификации наследственных вариантов, диагностики точечных мутаций, делеций и других изменений генома, а также для определения экспрессии генов после обратной транскрипции РНК в кДНК. В режиме реального времени можно не только установить наличие мишени, но и количественно оценить её содержание по значению порогового цикла (Ct). Метод не основан на агглютинации или образовании комплекса антиген–антитело: результат определяется наличием специфической последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной праймерам.
| Метод | Исследуемый объект | Основной принцип | Диагностические возможности |
|---|---|---|---|
| ПЦР | ДНК или РНК | Амплификация специфического участка нуклеиновой кислоты | Высокочувствительное выявление мутаций, возбудителей и генетических маркеров |
| ПЦР в реальном времени | ДНК или кДНК | Регистрация флуоресцентного сигнала в процессе амплификации | Качественная и количественная оценка целевой последовательности |
| Секвенирование | Фрагмент или экзомная последовательность ДНК | Определение порядка расположения нуклеотидов | Подтверждение и детальная характеристика генетического варианта |
| Цитогенетическое исследование | Хромосомы | Микроскопический анализ числа и структуры хромосом | Выявление крупных анеуплоидий и структурных перестроек |
| FISH | Хромосомные участки | Гибридизация флуоресцентных зондов с комплементарной ДНК | Обнаружение заданных делеций, амплификаций и транслокаций |
| Иммунологические методы | Антигены или антитела | Специфическое взаимодействие антиген–антитело | Серологическая и иммунодиагностика, но не непосредственное выявление последовательности ДНК |
Аналитическая точность ПЦР зависит от правильного выбора праймеров, качества биологического материала и соблюдения условий амплификации. Существенное значение имеют контроль отрицательных образцов, контроль контаминации и подтверждение клинической значимости выявленного варианта. Положительный результат следует интерпретировать с учётом клинических данных, вероятности заболевания и характеристик используемой тест-системы. При исследовании РНК предварительно выполняют обратную транскрипцию, поскольку стандартная ДНК-полимераза непосредственно не амплифицирует РНК.