2) цитратом натрия
3) красителем Гимза
4) акрихином
Правильный ответ — обработка препаратов гидроксидом бария. В классической методике C-дифференциальной окраски хромосомы последовательно подвергают щелочной денатурации раствором Ba(OH)2, затем обработке в солевом цитратно-буферном растворе и окрашиванию по Гимзе. Такая последовательность избирательно выявляет участки конститутивного гетерохроматина, которые на метафазных хромосомах формируют интенсивно окрашенные C-полосы.
Конститутивный гетерохроматин состоит преимущественно из высокоповторяющихся, транскрипционно малоактивных последовательностей и наиболее выражен в центромерных и перицентромерных областях; характерное усиленное окрашивание часто наблюдается также в длинном плече Y-хромосомы. Щелочная обработка гидроксидом бария изменяет состояние ДНК и белково-нуклеопротеинового комплекса, после чего различия в восстановлении структуры хроматина обеспечивают селективное связывание красителя с гетерохроматином. Метод применяют для оценки вариантов размеров гетерохроматиновых блоков, идентификации маркерных хромосом и уточнения некоторых структурных перестроек.
Краситель Гимза является завершающим визуализирующим этапом, но сам по себе не определяет специфичность C-окраски. Цитрат натрия может входить в состав цитратно-солевого буфера, используемого для последующей обработки, однако не является основным денатурирующим реагентом. Акрихин и родственные флуорохромы применяются преимущественно в методиках Q-окраски, основанных на флуоресцентном выявлении участков с определёнными свойствами ДНК.
| Метод | Ключевая обработка или реагент | Выявляемый признак | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| C-окраска | Гидроксид бария, последующая обработка в 2×SSC и окрашивание по Гимзе | Конститутивный гетерохроматин, главным образом центромерные и перицентромерные области | Оценка гетерохроматиновых вариантов, идентификация маркерных хромосом и некоторых перестроек |
| G-окраска | Ограниченный протеолиз трипсином и окрашивание по Гимзе | Чередующиеся тёмные и светлые полосы по длине хромосомы | Стандартный анализ кариотипа и выявление численных и структурных аномалий |
| Q-окраска | Флуорохромы хинакринового ряда или акридиновые красители | Флуоресцирующие, преимущественно AT-богатые участки; характерна яркая Y-хромосома | Идентификация отдельных хромосом и участков при флуоресцентной микроскопии |
| R-окраска | Модифицированная термическая или щелочная обработка с последующей окраской | Полосы, представляющие собой обратный вариант G-полос; хорошо видны терминальные участки | Уточнение перестроек, особенно в дистальных и теломерных областях |
| NOR-окраска | Импрегнация нитратом серебра | Активные районы организаторов ядрышка с генами рибосомной РНК | Оценка функционирующих NOR-участков на коротких плечах акроцентрических хромосом |
| T-окраска | Модификация дифференциальной окраски с усилением теломерного контраста | Теломерные и субтеломерные участки хромосом | Исследование терминальных перестроек и особенностей теломерных регионов |
Интенсивность и размер C-полос могут варьировать как между хромосомами, так и у здоровых людей, поэтому изолированный гетероморфизм не всегда означает патологию. Диагностическое значение приобретает сочетание C-окраски с G-бэндингом, FISH или молекулярно-цитогенетическими методами. При подозрении на структурную аномалию важно сопоставлять характер окраски с морфологией хромосомы, клиническими данными и результатами других исследований.