2) лейкоцитах периферической крови (+)
3) биоптате печени
4) образцах суточной мочи
Лейкоциты периферической крови содержат лизосомы и широкий набор лизосомных гидролаз, поэтому определение активности ферментов в выделенной лейкоцитарной фракции является доступным и информативным методом диагностики многих лизосомных болезней накопления. Снижение или отсутствие активности конкретного фермента приводит к нарушению расщепления соответствующего субстрата и его внутриклеточному накоплению. Так выявляют, например, дефицит β-глюкоцереброзидазы при болезни Гоше, α-галактозидазы A при болезни Фабри и кислой α-глюкозидазы при болезни Помпе.
Преимуществами исследования лейкоцитов являются малая инвазивность забора материала, относительно быстрое получение результата и более высокая специфичность по сравнению с определением некоторых ферментов в плазме. Для анализа требуется правильно обработанная свежая кровь, поскольку задержка транспортировки, гемолиз, переливание крови или выраженный лейкоцитоз могут искажать активность фермента. Выявленный дефицит обычно подтверждают молекулярно-генетическим исследованием соответствующего гена, а при сомнительном результате — анализом культивируемых фибробластов или специфических биомаркеров накопления.
| Биологический материал | Диагностическое значение | Основные особенности и ограничения |
|---|---|---|
| Лейкоциты периферической крови | Основной материал для количественного определения многих лизосомных ферментов | Доступный забор; необходимы правильное хранение и быстрое выделение клеток |
| Сухое пятно крови | Удобно для скрининга и первичного выявления сниженной ферментативной активности | Положительный результат требует подтверждения в лейкоцитах или фибробластах |
| Культура кожных фибробластов | Подтверждающее исследование при сомнительных или противоречивых результатах | Высокая информативность, но требуется биопсия кожи и длительное культивирование |
| Плазма или сыворотка | Применима для ограниченного перечня секретируемых ферментов и биомаркеров | Не все лизосомные ферменты стабильны или присутствуют в достаточной концентрации |
| Моча | Выявление накопленных метаболитов: гликозаминогликанов, олигосахаридов и других субстратов | Обычно отражает последствия ферментного дефекта, а не непосредственно активность фермента |
| Биоптат печени или мышцы | Используется в отдельных сложных случаях для морфологической и биохимической диагностики | Инвазивность ограничивает применение в качестве первичного метода |
Ферментный анализ устанавливает биохимический фенотип заболевания, но сам по себе не всегда позволяет определить генетический вариант и прогноз. Остаточная активность фермента может коррелировать с тяжестью болезни, однако границы между клиническими формами нередко перекрываются. Молекулярно-генетическое подтверждение необходимо для уточнения диагноза, обследования родственников и проведения пренатальной или преимплантационной диагностики. Интерпретацию результатов следует выполнять с учётом клинических проявлений, уровня специфических метаболитов и возможных псевдодефицитных аллелей.