2) определение делеций в гене SMN1 полуколичественным методом
3) определение количества копий генов SMN1 и SMN2 (+)
4) анализ точковых мутаций в гене SMN1
5q-спинальная мышечная атрофия наследуется по аутосомно-рецессивному типу и развивается при наличии патогенных изменений в обеих копиях гена SMN1. Мужчина, имеющий ребёнка с молекулярно подтверждённой SMA, с высокой вероятностью является гетерозиготным носителем семейного варианта. Поэтому его партнёрше показано не клиническое обследование, а преконцепционное молекулярно-генетическое тестирование, позволяющее оценить риск рождения больного ребёнка.
Основным методом носительского скрининга является количественное определение числа копий SMN1, прежде всего экзона 7, с помощью MLPA, количественной ПЦР или цифровой ПЦР. Выявление одной функциональной копии SMN1 соответствует носительству; наличие двух копий существенно снижает вероятность носительства, но не исключает конфигурацию 2+0 , при которой обе копии расположены на одной хромосоме, а на другой отсутствуют. Многие диагностические системы одновременно определяют дозировку SMN1 и SMN2, поэтому комплексное исследование количества копий обоих генов является наиболее полным из предложенных подходов.
Число копий SMN2 не устанавливает носительство, но имеет значение как модификатор клинического фенотипа: при подтверждённой SMA большее количество копий обычно связано с более высоким уровнем функционального белка SMN и тенденцией к менее тяжёлому течению. Электронейромиография и определение креатинкиназы предназначены для обследования пациентов с нервно-мышечной симптоматикой, а изолированный поиск точковых вариантов или отдельных делеций не обеспечивает полноценного первичного носительского скрининга.
| Исследование или результат | Диагностическое значение | Ограничения |
|---|---|---|
| Количественный анализ SMN1 и SMN2 | Определяет генную дозировку; используется как основной лабораторный подход при носительском скрининге SMA | Не всегда выявляет внутригенные точковые варианты и молчащее носительство 2+0 |
| Одна копия SMN1 | Соответствует гетерозиготному носительству делеции или конверсии одной копии гена | Для расчёта репродуктивного риска необходимо учитывать результат обследования партнёра |
| Две копии SMN1 | Значительно снижает остаточный риск носительства | Не исключает расположение обеих копий на одной хромосоме — конфигурацию 2+0 |
| Отсутствие копий SMN1 | При соответствующей клинической картине характерно для молекулярно подтверждённой 5q-SMA | Результат должен интерпретироваться совместно с клиническими и семейными данными |
| Определение числа копий SMN2 | Помогает прогнозировать вероятную тяжесть фенотипа у пациента с подтверждённой SMA | Самостоятельно не подтверждает и не исключает носительство SMN1 |
| Секвенирование SMN1 | Выявляет точковые варианты и небольшие инсерции или делеции, особенно при известном семейном варианте | Не заменяет первичный количественный анализ числа копий |
| Электронейромиография и уровень КФК | Используются для дифференциальной диагностики нервно-мышечных заболеваний у симптомных пациентов | Не позволяют надёжно установить бессимптомное носительство SMA |
До обследования женщины целесообразно уточнить молекулярный генотип больного ребёнка и подтвердить семейный вариант у его отца. Если оба будущих родителя являются носителями патогенных вариантов SMN1, риск рождения ребёнка с SMA при каждой беременности составляет 25%. Семье могут быть предложены пренатальная диагностика или преимплантационное генетическое тестирование моногенного заболевания. При выявлении у женщины двух копий SMN1 остаточный риск оценивают с учётом семейного анамнеза, этнического происхождения и маркеров, ассоциированных с конфигурацией 2+0.